[發明專利]一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法及使用的SPR芯片

在審

• 申請號: 201710487526.0
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107238713A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 范春雷;程向榮;陳喆;田男
• 申請（專利權）人: 浙江諾迦生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/543;G01N21/552;C07K16/44
• 代理公司: 杭州五洲普華專利代理事務所(特殊普通合伙)33260
• 代理人: 張瑜

1.一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法，所述檢測方法為利用SPR芯片在SPR儀上檢測待測樣本中的THC含量，其特征在于，所述SPR芯片為抗THC抗體SPR芯片，所述抗THC抗體SPR芯片通過以下方法制得：

S1、將THC分別偶聯于KLH和OVA，得到THC-KLH和THC-OVA；

S2、用上述THC-KLH和快速免疫佐劑免疫BALB/C小鼠，用THC-OVA檢測免疫小鼠抗THC的抗血清效價；

S3、取抗血清ELISA效價在6K以上的小鼠，取脾臟的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合，經單克隆篩選獲得抗血清ELISA效價在10K以上的抗THC抗體雜交瘤細胞株；

S4、將上述雜交瘤細胞株接種至BALB/C小鼠腹腔，從腹水中制備純化抗體；

S5、用本瓜蛋白酶將上述純化抗體水解成Fc段和Fab段，將Fab段包被于3D環氧SPR芯片，獲得抗THC抗體SPR芯片。

2.根據權利要求1所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法，其特征在于，步驟S2中所述的快速免疫佐劑為QuickAntibody-Mouse5W。

3.根據權利要求1所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法，其特征在于，步驟S2中所述的THC-OVA檢測在THC-KLH和快速免疫佐劑免疫BALB/C小鼠5周后進行。

4.根據權利要求1所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法，其特征在于，步驟S3中所述的抗THC抗體雜交瘤細胞株的靈敏度為0.3-3ng。

5.根據權利要求1所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法，其特征在于，步驟S4中所述的從腹水中制備純化抗體的具體過程為：從腹水中獲取抗體，然后用Protein G柱吸附純化得到純化抗體。

6.一種如權利要求1-5任一所述的唾液樣本中痕量大麻的檢測方法中使用的SPR芯片，其特征在于，所述的SPR芯片為抗THC抗體SPR芯片，所述抗THC抗體SPR芯片通過以下方法制得：

S1、將THC分別偶聯于KLH和OVA，得到THC-KLH和THC-OVA；

S2、用上述THC-KLH和快速免疫佐劑免疫BALB/C小鼠，用THC-OVA檢測免疫小鼠抗THC的抗血清效價；

S3、取抗血清ELISA效價在6K以上的小鼠，取脾臟的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合，經單克隆篩選獲得抗血清ELISA效價在10K以上的抗THC抗體雜交瘤細胞株；

S4、將上述雜交瘤細胞株接種至BALB/C小鼠腹腔，從腹水中制備純化抗體；

S5、用本瓜蛋白酶將上述純化抗體水解成Fc段和Fab段，將Fab段包被于3D環氧SPR芯片，獲得抗THC抗體SPR芯片。

7.根據權利要求6所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法中使用的SPR芯片，其特征在于，步驟S2中所述的快速免疫佐劑為QuickAntibody-Mouse5W。

8.根據權利要求6所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法中使用的SPR芯片，其特征在于，步驟S2中所述的THC-OVA檢測在THC-KLH和快速免疫佐劑免疫BALB/C小鼠5周后進行。

9.根據權利要求6所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法中使用的SPR芯片，其特征在于，步驟S3中所述的抗THC抗體雜交瘤細胞株的靈敏度為0.3-3ng。

10.根據權利要求6所述的一種唾液樣本中痕量大麻的檢測方法中使用的SPR芯片，其特征在于，步驟S4中所述的從腹水中制備純化抗體的具體過程為：從腹水中獲取抗體，然后用Protein G柱吸附純化得到純化抗體。