[發(fā)明專利]用于基因分型檢測(cè)α+缺失型地中海貧血的引物組及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710486950.3
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN109112203A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陳治中
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于基因分型檢測(cè)α⁺缺失型地中海貧血的引物組，包括如下引物對(duì)：

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的3.7F/3.7R；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的DPAIC-F/DPAIC-R；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的4.2F/4.2R。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組，其特征在于，所述檢測(cè)指以人體體液和/或人體基因組DNA為模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

3.用于快速檢測(cè)α⁺缺失型地中海貧血基因型的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述快速檢測(cè)指，直接以人體體液為PCR反應(yīng)的模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進(jìn)行PCR和/或電泳的試劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進(jìn)行PCR的試劑包括dNTP、DNA聚合酶、緩沖液、雙蒸水、MgCl₂；

所述用于進(jìn)行電泳的試劑包括瓊脂糖、蒸餾水、核酸染料；

所述核酸染料選自：EB、GelGreen、SYBR GreenⅠ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)體系為：模板1～4μl；各引物：0.1～1μmol/L；MgCl₂濃度為1.5～5mM/L；dNTP的濃度為100～500μM/L；DNA聚合酶的濃度為1～4U/反應(yīng)；

所述PCR的反應(yīng)體系優(yōu)選包括下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、DPAIC-F/3.7F 0.1-1份、DPAIC-R 0.1-1份、4.2F 0.1-1、4.2R0.1-1份、3.7R 0.1-1份、模板+超純水 4-9.4份；

所述PCR的反應(yīng)體系進(jìn)一步優(yōu)選包括下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、DPAIC-F/3.7F 0.5份、DPAIC-R 0.3份、4.2F 0.2份、4.2R 0.2份、3.7R 0.2份、模板+超純水 8.1份；

優(yōu)選的，所述引物組各引物摩爾濃度比例如下：

DPAIC-F/3.7F∶DPAIC-R∶4.2F∶4.2R∶3.7R＝5∶3∶2∶2∶2；

所述PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃8～12分鐘；以95℃15～30秒，60-66℃35～70秒，72℃90-180秒為1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行30～35個(gè)循環(huán)；72℃8分鐘；

所述PCR的反應(yīng)程序優(yōu)選為：95℃5min；以94℃30sec、63℃～65℃45sec～1min、72℃130sec為1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行32個(gè)循環(huán)；72℃8min、12℃12sec；

所述電泳指，將所述PCR反應(yīng)產(chǎn)物置于質(zhì)量比為0.8～1.5％瓊脂糖凝膠中，在5V/cm電壓下電泳約40～55分鐘；所述瓊脂糖凝膠中還添加有體積比0.005％核酸染料。

8.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的試劑盒，其特征在于，所述模板還包括固定在固體載體上的人體血液、和/或體液、和/或基因組DNA、和/或胚胎遺傳物質(zhì)；

優(yōu)選地，所述模板可以選自濾紙片干血斑樣品、濾紙片干羊水樣品、濾紙片干漿膜腔液樣品、濾紙片干關(guān)節(jié)液樣品、濾紙片干唾液樣品、濾紙片干基因組DNA樣品、和/或?yàn)V紙片干胚胎遺傳物質(zhì)樣品。