[發明專利]一種檢測非缺失型α地中海貧血的芯片和試劑盒

在審

• 申請號: 201710485329.5
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN109112183A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請（專利權）人: 陳治中
• 主分類號: C12Q1/6837
• 分類號: C12Q1/6837
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發明“一種檢測非缺失α?地中海貧血基因的基因芯片、PCR擴增試劑以及試劑盒”屬于分子診斷技術，其特征在于，基于直接PCR、Gap?PCR和反向點雜交相結合的檢測原理，根據各基因型的突變或缺失位點設計相應的擴增引物和探針，以生物素標記引物，以氨基標記探針，并以基因芯片為基底，將探針固定在DNA芯片上，通過特異性引物擴增出來的PCR產物與探針進行雜交，以信號顯色盒判讀來進行地貧的診斷。

技術領域

本發明涉及一種非缺失型α地中海貧血的分子檢測，特別是涉及一種利用直接PCR(Direct PCR)檢測由于點突變引起的α地中海貧血試劑盒。

背景技術

地中海貧血(thalassemia,簡稱地貧)，即珠蛋白生成障礙性貧血，為一種常染色體隱性遺傳病，是由珠蛋白基因的缺失或者點突變，使珠蛋白膚鏈合成障礙或速率降低、血紅蛋白產量減少所引起的一組常染色體單基因遺傳性溶血性貧血。在我國廣東、廣西、四川多見，長江以南各省區有散發病例是由珠蛋白基因缺失或者點突變所引起珠蛋白鏈合成障礙的常染色體單基因遺傳性溶血性貧血。根據受累的氨基酸鏈來分類，通常將地中海貧血分為α、β、δβ和δ等4種類型，其中以α和β地中海貧血較為常見。

1925年，Cooley和Lee首先描述地中海貧血，最早發現于地中海區域，實際上，本病在世界各地均有發生，以地中海地區，中非洲，南太平洋地區發病較多；該病是我國南方常見的遺傳性貧血病，總發病率為2.46％，其中廣西、廣東、江西、四川和浙江各省(區)的發病率分別為14.95％、4.11％、2.60％、1.92％和1.20％。

α-地中海貧血(以下簡稱α-地貧)，是一組因α-珠蛋白鏈不能合成或合成減少，使β鏈與δ鏈異常結合而導致HbA2減少的疾病。α-珠蛋白基因缺失或點突變均可導致α-地貧，分別稱為缺失型或非缺失型α-地貧。在中國，目前已報道至少6種非缺失型α-地貧基因突變，其中WS、QS和CS三種點突變是最常見突變，這些突變均位于α2-珠蛋白基因上。通常α2較α1基因的功能強，表達量較α1基因的多；當α珠蛋白發生基因突變時，α2基因的突變一般會比α1基因突變更能減少基因產物的表達。當α2基因發生非缺失型突變時，α-鏈的合成產量比α2基因發生缺失時明顯減少。資料表明中國α-地貧發病率最高的廣西有45.8-53.3％的Hb H病患者攜帶非缺失型α地貧基因，這類病人比那些缺失3個α珠蛋白基因所表現出來的臨床癥狀更嚴重，貧血更嚴重。α2-珠蛋白基因發生非缺失型突變的純合子或復合雜合子會引起重度貧血的Hb H癥狀。目前對地貧尚無有效的治療方法，因此通過婚檢及產前篩查等途徑進行大規模的人群篩查和診斷，發現攜帶地貧基因的夫妻，在妊娠早期進行產前基因診斷，對產前診斷為中重型地貧的胎兒進行有效干預和終止妊娠，是防止中重型地貧兒出生、提高出生人口素質的有效措施。

目前已報道的基因突變檢測方法很多，包括基于單鏈構象多態性(SSCP)、引物延伸技術、聚合酶鏈式反應限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)、TaqMan探針技術、變性高效液相色譜(DHPLC)、高分辨熔解曲線檢測技術(HRM)、DNA直接測序和DNA微陣列技術等。但這些方法檢測過程繁瑣、檢測所用時間長、使用試劑或者儀器昂貴和特殊的標記引物等，因而不利于臨床廣泛的推廣應用。

現有的非缺失型α地中海貧血基因檢測相關的專利和市場產品種類有幾種，其主要是利用PCR反向結合點雜交法、基因芯片法、TaqMan探針熒光PCR法與高分辨熔解曲線檢測技術(HRM)。這些PCR診斷性檢測都是以血液或羊水等作為生物性材料，從血液中提取DNA；可是這樣既耗時又容易導致提取過程中的DNA污染。耗時長，且成本較高，難以滿足臨床檢測快速，低成本的要求。

另外，同時所需樣本量多，對于邊遠地帶采集的標本運輸需冷鏈設備，需三級包裝系統，標本儲存空間大；生物安全風險系數高。對全血、羊水和DBS直接擴增檢測地貧技術的專利尚無，市場上尚無此類產品。

發明內容