[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)非缺失型α地中海貧血的芯片和試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710485329.5
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109112183A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陳治中
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6837
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6837
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.一種檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的基因芯片，其特征在于，所述芯片上固定有：檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO：4-6所示，以及

檢測(cè)非缺失型α-地中海貧血基因所對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照探針，其堿基序列如SEQ ID NO.：1-3。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芯片，其特征在于，所述芯片上還固定有：

陽(yáng)性對(duì)照探針(AC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：7

陰性對(duì)照探針(NC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：8

顯色體系控制探針(CC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：9。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的芯片，其特征在于，所述芯片的基底材料選自：硝酸纖維素、醋酸纖維素、玻璃片、硅膠晶片、尼龍膜、聚丙烯膜和微縮磁珠組成的組。

4.一種用于快速檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的PCR擴(kuò)增試劑，其特征在于：包含如下核苷酸序列的引物對(duì)，

APF：SEQ ID NO.10：

APR：SEQ ID NO.11；

其擴(kuò)增的特征序列與權(quán)利要求1-3任一所述的基因芯片中的檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針探針特異性結(jié)合；

所述擴(kuò)增試劑中加入其它PCR擴(kuò)增組分，通過(guò)一次PCR反應(yīng)對(duì)待測(cè)樣品或提取自待測(cè)樣品的DNA直接進(jìn)行非缺失α-地中海貧血基因的檢測(cè)，所述待測(cè)樣品選自新鮮采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反復(fù)凍融的陳舊性抗凝外周血、培養(yǎng)羊水細(xì)胞、絨毛、羊水、臍帶血、末梢血、DBS樣本和/或類(lèi)似DBS處理的樣本、唾液、胚胎的遺傳物質(zhì)包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞，即囊胚細(xì)胞、多個(gè)細(xì)胞或單個(gè)細(xì)胞等。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR擴(kuò)增試劑，其特征在于，用于一個(gè)反應(yīng)的所述PCR擴(kuò)增試劑中，含有

使用時(shí)，添加無(wú)菌蒸餾水與待測(cè)樣品或提取自待測(cè)樣品的DNA以達(dá)到20份體積。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述PCR擴(kuò)增試劑，其特征在于，用于一個(gè)反應(yīng)的所述PCR擴(kuò)增試劑中，含有:

使用時(shí)，添加無(wú)菌蒸餾水與待測(cè)樣品或提取自待測(cè)樣品的DNA以達(dá)到20份體積。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一所述的擴(kuò)增試劑，其特征在于，所述引物的5′端標(biāo)記有標(biāo)記物，用于使擴(kuò)增的條帶帶有所述標(biāo)記物。

8.一種快速檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-3任一所述的芯片以及權(quán)利要求4-6任一所述的擴(kuò)增試劑。

9.權(quán)利要求1-3任一所述的芯片的制備方法，步驟如下：

(1)配制探針工作液：將合成好的特異性探針稀釋成10μM的工作液，以備點(diǎn)樣用；

(2)固定探針：尼龍膜浸泡于10％的EDAC溶液中活化30分鐘，純水洗滌后室溫晾干；在活化處理好的尼龍膜上點(diǎn)上所述工作液，每滴0.5μL；點(diǎn)膜結(jié)束后，將膜放置于室溫進(jìn)行反應(yīng)；

(3)制備基因芯片：利用氫氧化鈉停止反應(yīng)，制得基因芯片；

其中，所述特異性探針包括檢測(cè)非缺失α-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO：4-6所示，以及

檢測(cè)非缺失型α-地中海貧血基因所對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照探針，其堿基序列如SEQ ID NO.：1-3。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述特異性探針還包括陽(yáng)性對(duì)照探針(AC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：7

陰性對(duì)照探針(NC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：8

顯色體系控制探針(CC)，其堿基序列如SEQ ID NO.：9。