[發明專利]一種抑制力學感知蛋白PDLIM3降解的純化方法

在審

• 申請號: 201710480803.5
• 申請日: 2017-06-22
• 公開（公告）號: CN107267580A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 侯海;石苗;周伯儒;尹大川
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K14/47;C07K1/34
• 代理公司: 西北工業大學專利中心61204
• 代理人: 顧潮琪

1.一種抑制力學感知蛋白PDLIM3降解的純化方法，其特征在于包括下述步驟：

第一步，表達力學感知蛋白PDLIM3，將表達菌株接種于培養基中，培養至OD₆₀₀值為0.4～0.8時，加入摩爾濃度為1M IPTG的母液至IPTG的終摩爾濃度為0.2～0.8mM，繼續培養3～8h；在0～4℃溫度下，1000～4000rpm離心菌液10～30min，棄掉上清液，收集菌體；

第二步，配置摩爾濃度為50mM Tris-HCl、50mM NaCl、pH8.0的裂解液，用裂解液重懸菌體，菌體與裂解液的質量比為1:5～20；然后加入EDTA終摩爾濃度0.5～1.5mM、PMSF終摩爾濃度0.3～0.7mM、β-巰基乙醇終摩爾濃度5～15mM、lysozyme終濃度0.5-1.5mg/mL和甘油終體積濃度3～7％；將溶液混合均勻后，在0～4℃溫度下超聲破碎細胞0.5～1.5小時，最后在0～4℃下，10000～15000rpm離心10～60min，收集上清液；

第三步，用孔徑0.22μm的濾膜過濾上清液，然后向濾出物中加入EDTA終摩爾濃度0.5～1.5mM、PMSF終摩爾濃度0.3～0.7mM、β-巰基乙醇終摩爾濃度5～15mM、甘油終體積濃度3～7％和咪唑終摩爾濃度5～15mM；混合均勻后，加入Ni Sepharose^TM6 Fast Flow填料，濾出物與Ni Sepharose^TM6 Fast Flow填料體積比為50～200：1，在0-4℃下旋轉混勻1-6h，使目的蛋白與填料充分結合；采用重力流色譜柱和摩爾濃度為80-500mM的咪唑溶液對目的蛋白進行洗脫，收集洗脫液；

第四步，使用截留分子量25-30kDa超濾膜的超濾管過濾洗脫液，濃縮目的蛋白。