[發明專利]一種提高重組人腦利鈉肽融合蛋白表達量的發酵工藝

有效

• 申請號: 201710479162.1
• 申請日: 2017-06-22
• 公開（公告）號: CN107177649B
• 公開（公告）日: 2020-03-20
• 發明（設計）人: 張艷;任東升;劉希望
• 申請（專利權）人: 西藏諾迪康藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 成都坤倫厚樸專利代理事務所(普通合伙) 51247
• 代理人: 劉坤

1.一種提高重組人腦利鈉肽融合蛋白表達量的發酵工藝，其特征在于：它包括以下步驟：

在發酵罐中，加入BHD培養基18L～20L和甘油65mL～80mL，以及氨芐青霉素至其終濃度為100mg/L，接種重組人腦利鈉肽基因工程菌300mL～500mL，調節通氣量使發酵液中的溶氧量為30％～50％，調節pH值為6.8～7.2，培養溫度為37℃；當OD600為10～15時，加入異丙基硫代半乳糖苷至其終濃度為0.5mmol/L～1.0mmol/L誘導，并向發酵罐內流加150mL/h～300mL/h的補料液A，3h～6h后停止發酵培養，收獲細菌，即可；

其中，

所述BHD培養基的配方為：每升BHD培養基中，含有胰蛋白胨4g～6g、酵母粉8g～12g、磷酸二氫鉀2g～5g、磷酸氫二鉀10g～15g、硫酸鎂0.4g～1g、氯化鈉0.4g～1g、維生素10mg～15mg和微量金屬元素20mg～30mg，溶劑為水；

所述補料液A的配方為：每升補料液A中，含有胰蛋白胨150g～200g、酵母粉60g～100g和甘油160mL～220mL，溶劑為水；

所述維生素選自泛酸、葉酸、吡哆醇中的一種或兩種以上；所述微量金屬元素選自六水三氯化鐵、四水氯化鋅、六水氯化鈣、五水硫酸銅中的一種或兩種以上。

2.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：加入BHD培養基18.5L和甘油74mL；或者，加入BHD培養基20L和甘油68mL。

3.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：接種重組人腦利鈉肽基因工程菌400mL，調節通氣量使發酵液中的溶氧量為30％～50％，調節pH值為7.0。

4.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：當OD600為12時，加入異丙基硫代半乳糖苷至其終濃度為0.5mmol/L～1.0mmol/L誘導，并向發酵罐內流加200mL/h的補料液A，4h后停止發酵培養。

5.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：所述BHD培養基的配方為：每升BHD培養基中，含有胰蛋白胨5g、酵母粉10g、磷酸二氫鉀2.31g、磷酸氫二鉀12.54g、硫酸鎂0.5g、氯化鈉0.6g、維生素13.68mg和微量金屬元素25.8mg，溶劑為水。

6.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：所述維生素是由以下重量份數的組分組成：泛酸10份～12份、葉酸0.05份～0.1份、吡哆醇2.5份～3份。

7.根據權利要求6所述的發酵工藝，其特征在于：所述維生素是由以下重量份數的組分組成：泛酸10.8份、葉酸0.08份、吡哆醇2.8份。

8.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：所述微量金屬元素是由以下重量份數的組分組成：六水三氯化鐵12份～15份、四水氯化鋅2份～5份、六水氯化鈣2份～5份、五水硫酸銅2份～5份。

9.根據權利要求8所述的發酵工藝，其特征在于：所述微量金屬元素是由以下重量份數的組分組成：六水三氯化鐵14份、四水氯化鋅4份、六水氯化鈣4份、五水硫酸銅3.8份。

10.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于：所述補料液A的配方為：每升補料液A中，含有胰蛋白胨172g、酵母粉86g和甘油200mL，溶劑為水。

11.一種用于重組人腦利鈉肽基因工程菌發酵的BHD培養基，其特征在于：所述BHD培養基的配方為：每升BHD培養基中，含有胰蛋白胨4g～6g、酵母粉8g～12g、磷酸二氫鉀2g～5g、磷酸氫二鉀10g～15g、硫酸鎂0.4g～1g、氯化鈉0.4g～1g、維生素10mg～15mg和微量金屬元素20mg～30mg，溶劑為水。