[發明專利]一種蘋果多酚氧化酶活性促進劑及其應用

有效

• 申請號: 201710476147.1
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107099515B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 郭霞;郭晶晶;張禮飛;萬舒雨
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明涉及酶活性技術領域，特別涉及一種蘋果多酚氧化酶活性促進劑及其應用。本發明的蘋果多酚氧化酶活性促進劑，包括十二烷基三甲基溴化銨或十六烷基三甲基溴化銨與Gemini表面活性劑以重量比為10～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性劑為二溴化?雙(二甲基十二烷基)戊二銨或二溴化?雙(二甲基十六烷基)戊二銨。本發明還包括應用上述促進劑提高蘋果多酚氧化酶活性的應用，能夠將蘋果多酚氧化酶的活性提高至240％，且促進劑的用量水平低。

技術領域

本發明屬于酶活性技術領域，具體涉及一種蘋果多酚氧化酶活性促進劑及其應用。

背景技術

多酚氧化酶是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶，普遍存在于植物中，能夠將酚或多酚氧化成對應的醌。其在食品、醫藥及環保行業有著廣泛應用，研究其活性可以更好地解決食物儲存、植物抵抗病原體及病毒侵害、含酚類有機物工業廢水的生物降解等問題。

目前，研究人員多數研究提純后的多酚氧化酶(PPO)，包括探究酶的最佳活性條件，表面活性劑(十二烷基硫酸鈉(SDS))對酶活性的激發等，以達到最大可能提高酶活性的目的。PPO大量存在于植物中，其中蘋果中含量豐富，我國蘋果種植面積和產量均占世界總量的40％以上，但從蘋果中提取的PPO活性較低。

專利CN 105734025 A利用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和十二烷基三甲基溴化銨(DTAB)提高蘋果中PPO粗酶的活性。十六烷基三甲基溴化銨和十二烷基三甲基溴化銨是由一個親水基和一個疏水基通過化學鍵連接構成的單鏈表面活性劑，屬于傳統的表面活性劑。當CTAB濃度為0.3-1.0mM時，粗酶活性可提高最大為75％左右。當DTAB濃度為15mM時，粗酶活性提高最大為50％。從以上數據可知，傳統表面活性劑的用量較多，且對酶活性的調控作用也不夠明顯。

發明內容

本發明將Gemini表面活性劑與傳統單鏈表面活性劑進行復配，探究了表面活性劑復配體系對多酚氧化酶活性的影響，以期尋找協同效應較好的復配體系，以降低表面活性劑的用量，拓展其應用范圍。

本發明的目的在于提供一種能夠更大程度提高蘋果多酚氧化酶活性的促進劑，及利用該促進劑提高蘋果多酚氧化酶活性的應用。

本發明的技術方案如下：

本發明提供了一種蘋果多酚氧化酶活性促進劑，包括十二烷基三甲基溴化銨或十六烷基三甲基溴化銨與Gemini表面活性劑以重量比為10～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性劑為二溴化-雙(二甲基十二烷基)戊二銨或二溴化-雙(二甲基十六烷基)戊二銨。

優選的，所述蘋果多酚氧化酶活性促進劑，包括十二烷基三甲基溴化銨與Gemini表面活性劑以重量比為200～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性劑為二溴化-雙(二甲基十二烷基)戊二銨或二溴化-雙(二甲基十六烷基)戊二銨。

優選的，所述蘋果多酚氧化酶活性促進劑，包括十六烷基三甲基溴化銨與Gemini表面活性劑以重量比為10～100:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性劑為二溴化-雙(二甲基十二烷基)戊二銨或二溴化-雙(二甲基十六烷基)戊二銨。

本發明還包括采用上述促進劑提高蘋果多酚氧化酶活性的應用，提取蘋果多酚氧化酶粗酶液，在所述促進劑存在的條件下，以多酚氧化酶為催化劑進行催化反應。

優選的，在所述催化反應體系中，所述促進劑在所述催化反應體系中的濃度分別為：十二烷基三甲基溴化銨或十六烷基三甲基溴化銨0.1～20mM，Gemini表面活性劑5～45μM。

優選的，所述催化反應體系中，還包括底物鄰苯二酚和溶解所述底物的磷酸鹽緩沖溶液，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為6.0～8.0。

優選的，所述催化反應的溫度為30℃～50℃。