[發明專利]兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法

在審

• 申請號: 201710472440.0
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107079817A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 王蓮輝;田凡;顏風霞;楊林;姜運力;侯娜;李從瑞;羅在柒;潘得權;廖小鋒
• 申請（專利權）人: 貴州省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02
• 代理公司: 遵義浩嘉知識產權代理事務所(普通合伙)52112
• 代理人: 張利秋

技術領域

本發明涉及生物工程的植物組織培養繁育方法，特別是涉及一種兜蘭新品種“優優兜蘭”的組培快繁方法。

背景技術

蘭科植物是自然界最大的家族之一，是有花植物中最為龐大和進化水平極高的類群之一，在被子植物當中僅次于菊科和禾本科位于第三大科。全世界的蘭科植物約有700屬，20000-30000種，廣泛分布于從溫帶、亞熱帶到熱帶的廣大區域。我國已發現并定名的蘭花約170余屬1300余種 ，其中2/3為附生蘭，1/3為地生蘭 。目前，整個蘭科植物已被列入《瀕危野生動植物種國際貿易公約》附錄Ⅰ或Ⅱ。貴州是一個喀斯特地貌廣泛發育的高原省份，在地理環境上屬于亞熱帶氣候，具有獨特復雜的地形地貌、植被類型多樣和良好的水熱條件，適宜多種植物繁衍生息，同時也孕育了較豐富的蘭花資源。貴州省境內分布有蘭科植物約76屬320余種，包括大量的變種及品種。

兜蘭屬（Paphiopedilum Pfitz）植物是蘭科植物最具觀賞價值的物種之一，兜蘭由于獨特的花朵造型、絢麗的花朵色彩、持久的觀賞花期而具有極高的觀賞價值，全世界廣泛栽培。中國是兜蘭屬植物的主要產地之一，是世界兜蘭屬的重要分布地和許多新種的模式產地，有18種（Chen，1999）。自20世紀80年代初，我國的兜蘭屬植物開始出現在歐美市場；80年代末至90年代中期是我國野生兜蘭屬植物貿易的高峰，兜蘭市場迅速擴大，不計其數的植株出現在一些歐美種植場和花卉市場。

兜蘭新品種“優優”（ Paphiopedilum GZSLKY Youyou），于 2016年 08 月 17日在英國皇家園藝學會（Royal Horticultural Society簡稱RHS）登陸，并獲得了蘭花新品種登記證書。英國皇家園藝學會是世界上唯一的、權威的蘭花新品種登錄機構，該機構只登錄首次育成的蘭花屬間和種間雜交種。“優優兜蘭”是以長瓣兜蘭（Paphiopedilum dianthum）為母本， 小葉兜蘭（Paphiopedilum barbigerum）為父本，進行雜交育種方法選育而成，

由于“優優兜蘭”胚發育不完全，在自然狀態下繁殖困難，存在種子萌發率極低，成苗率低，生長速度慢等缺點；傳統的無性分株繁殖法，周期長，繁殖系數低，每年只能增殖1～3倍，常規繁殖難度大。因此如何運用植物生物促成方法快速繁殖“優優兜蘭”已成為蘭科植物保育及應用的重點課題。

兜蘭屬的雜交育種由于受種子萌發條件的限制，發展很緩慢，自從蘭科植物無菌播種技術應用后，兜蘭屬植物雜交育種得到了快速發展。但“優優兜蘭”屬于蘭科、兜蘭屬植物的新品種，其組培快繁方法尚處于摸索、處理階段，“優優兜蘭”種子極其微小，采用其它兜蘭屬的成熟的組培快繁育苗方法，導致敗育率極高，甚至出現完全敗育的狀態。而蘭花的培育周期又長，僅雜交、育苗期動輒就要1-3年。

所以研究一種敗育率低、采用組培快繁方法、可實現批量工廠化育苗方法，就成為“優優兜蘭”快速走向市場、滿足人們需求的重要前提條件。

發明內容

為解決現有技術中“優優兜蘭”因胚發育不完全，在自然狀態下繁殖困難的技術問題，本發明提供一種敗育率低，可以極大的提高繁殖系數的高效率試管繁殖方法，即兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法。

兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，包括以下步驟：

A、人工雜交授粉：以長瓣兜蘭為母本， 小葉兜蘭為父本，選取生長健壯的長瓣兜蘭母本及父本在開花時開展人工輔助授粉，授粉后370到390天，將發育至基本成熟而未開裂的果實作為外植體；

B、 無菌播種及原球莖萌發階段：選用飽滿的果實用酒精浸泡 ，置于升汞溶液中消毒，無菌水沖洗，用解剖刀切開果實，用接種針將褐色粉末種子接種到培養基上，培養80-100天，形成原球莖及芽混合體；

C、增殖分化培養階段：為獲得更多的種苗，將芽和原球莖混合組織接種在1/2MS添加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、α-萘乙酸（NAA）培養基上，經140-160天培養，長成叢生帶短根的小苗；

D、壯苗生根階段：將長成的叢生植株分開，接種到1/4MS添加α-萘乙酸（NAA）的培養基上，直到長成具2-3條根、3-4片葉的完整植株。