[發明專利]兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法

在審

• 申請號: 201710472440.0
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107079817A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 王蓮輝;田凡;顏風霞;楊林;姜運力;侯娜;李從瑞;羅在柒;潘得權;廖小鋒
• 申請（專利權）人: 貴州省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02
• 代理公司: 遵義浩嘉知識產權代理事務所(普通合伙)52112
• 代理人: 張利秋

1.兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，包括以下步驟：

A、人工雜交授粉：以長瓣兜蘭為母本， 小葉兜蘭為父本，選取生長健壯的長瓣兜蘭母本及父本在開花時開展人工輔助授粉，授粉后370到390天，將發育至基本成熟而未開裂的果實作為外植體；

B、 無菌播種及原球莖萌發階段：選用飽滿的果實用酒精浸泡 ，置于的升汞溶液中消毒，無菌水沖洗，用解剖刀切開果實，用接種針將褐色粉末種子接種到培養基上，培養80-100天，形成原球莖及芽混合體；

C、增殖分化培養階段：為獲得更多的種苗，將芽和原球莖混合組織接種在1/2MS添加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、α-萘乙酸（NAA）培養基上，經140-160天培養，長成叢生帶短根的小苗；

D、壯苗生根階段：將長成的叢生植株分開，接種到1/4MS添加α-萘乙酸（NAA）的培養基上，直到長成具2-3條根、3-4片葉的完整植株；

E、 煉苗及移栽：當試管苗長至3-4厘米時出瓶，出瓶前在溫室中的自然光照下煉苗，然后將其從玻璃瓶中取出，移入碎樹皮和腐殖土的混合基質中；加強溫度、溫度、遮陰及通風管理，“優優兜蘭”即可正常生長，成苗的移栽成活率可達90％以上；定期澆一次含氮、磷、鉀的復合肥，薄肥勤施，栽培中加強病蟲害管護措施即可建立兜蘭新品種“優優兜蘭”種苗的產業化培育方法體系。

2.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：8月初兜蘭開花季節，人工控制調節父母本的開花狀況，母本長瓣兜蘭花苞快張開時，噴灑一次濃度為1000PPM的乙烯利來促進長瓣兜蘭開花，一周后再用同樣的方法促進小葉兜蘭開花，以長瓣兜蘭開花開始計算時間兩周后再進行人工輔助授粉，這時長瓣兜蘭柱頭分泌大量粘液，小葉兜蘭花粉具活力，雜交親和力強，效果最佳，果實飽滿，種子組培后成活率高。

3.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟B中，所述的用酒精浸泡時，選用75％的酒精，浸泡時間為5min；升汞溶液中消毒指0.1％的升汞溶液，浸泡10 min；所述的無菌水為蒸餾水或肥皂水。

4.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟B中，所述的培養基是指1/2MS添加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.5-1.0毫克/升、α-萘乙酸（NAA0.1-0.2毫克/升培養基。

5.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟B中，無菌播種及原球莖萌發階段培養90天時進行下一步驟。

6.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟C中培養基配方中，6-芐基氨基嘌呤(6-BA)濃度為2-4毫克/升，α-萘乙酸（NAA）濃度為0.1-0.5毫克/升，培養時間為150天為佳。

7.根據權利要求1所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟D中，叢生植株分開后接種到1/4MS添加α-萘乙酸（NAA）0.1-0.5毫克/升的培養基上，培養55-65天后長成具2-3條根、3-4片葉的完整植株。

8.根據權利要求1-7任一權利要求所述的兜蘭新品種“優優兜蘭”組培快繁方法，其特征在于：步驟E中，當試管苗長至3-4厘米時，出瓶前在溫室中的自然光照下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，移入碎樹皮和腐殖土為4:1的混合基質中；溫室保持15-28℃的溫度、80%以上的濕度、70-80%的遮陰并通風，“優優兜蘭”即可正常生長，成苗的移栽成活率可達90％以上；通常15天左右澆一次氮：磷：鉀的比例為14：16；15的復合肥1000倍，薄肥勤施，栽培中加強病蟲害管護措施。