[發明專利]阻斷型CD47納米抗體及其用途

有效

• 申請號: 201710472025.5
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN109096395B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 安康;安文琪;馬小偉;范蓓;張寶獻;潘若文
• 申請（專利權）人: 華蘭生物工程股份有限公司;華蘭基因工程有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

本發明提供了阻斷型CD47納米抗體及其用途。具體地，本發明提供了一種針對整合素相關蛋白(CD47)的納米抗體。具體而言，該抗體不僅能夠特異結合人CD47，還能夠有效阻斷CD47與其配體SIRPa的相互作用。本發明同時公開了該抗體的編碼序列及其用途，特別是在治療和/或預防、或診斷CD47相關疾病例如腫瘤中的用途。

技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，涉及一種針對整合素相關蛋白(CD47)分子胞外段的阻斷型納米抗體。還公開了其編碼序列、相關制備方法及其用途，特別是在治療和/或預防、或診斷CD47相關疾病例如腫瘤中的用途。

背景技術

CD47也被稱為整合素相關蛋白(integrin-associatedprotein，IAP)，是免疫球蛋白超家族中的重要成員，在不同組織細胞中均廣泛表達。CD47的化學特性是一個50kD的膜糖蛋白，包含1個胞外類Ig可變結構域、5個高度疏水延伸的跨膜片段以及1個短選擇性拼接的羧基端胞質尾區。CD47分子在集體中多重調控作用的發揮主要基于與信號調節蛋白a、血小板反應蛋白、及整合素間的相互作用，參與中性粒細胞、單核細胞和T細胞等免疫細胞跨膜遷移以及吞噬作用的調節。CD47與抑制性受體信號調節蛋白a互為受體和配體，可形成CD47-SIRPa信號復合體，該信號復合物具有介導雙向信號調節并調控多種免疫反應進程的作用。在白血病、非霍奇金淋巴瘤、膀胱癌和乳腺癌等惡性腫瘤中，CD47高表達于腫瘤細胞表面，提示臨床預后不良。腫瘤細胞通過借此“別吃我”信號，逃避了腫瘤免疫。然而，通過使用抗CD47抗體阻斷CD47和SIRPa的相互作用具有靶向性治療的效果。目前處于Phase I的三個藥物分別為Forty Seven的Hu5F9-G4、Celgene的CC-90002以及Trillium的TTI-621。Trillium的CD47抗體項目為SIRPa-Fc融合蛋白，與Hu5F9-G4具有相類似的CD47親和力(nM級別)。而SIRPa-Fc分子量更小約80kDa，相對于抗體分子的150kDa具有更好的穿透性和組織分布性；SIRPa-Fc對于紅細胞的親和力要遠遠低于Hu5F9-G4，表明其可能具有更好的安全性。

傳統單克隆抗體分子量較大、難以滲透進入組織間，并且單抗的生產周期長、人源化較為困難，因此，尋找具有更小分子量的抗體尤為重要。除抗原結合片段(Fab)、單鏈抗體(scFv)等基于傳統單抗進行改造的小分子抗體外，在自然界駱駝科與鯊魚科的體內存在一種天然的目前發現的最小抗原結合片段。這種抗體在1989年由布魯塞爾自由大學Muyldermans等發現，他們在分離檢測駱駝血清中的抗體時首次發現了一種重鏈抗體，該抗體缺失了兩條輕鏈CL和恒定區CH1，僅由N端可變區(VHH)，鉸鏈區和兩個恒定區(CH1、CH2)構成，其可變區(VHH)即稱為納米抗體。納米抗體分子量僅有約15kDa，其納米級的分子大小和獨特的結構賦予它優于傳統抗體的多種特性，如穩定性高、水溶性好、人源化簡單、靶向性高、穿透性強等。納米抗體因其特殊的結構性質，兼具了傳統抗體和小分子藥物的優勢，幾乎完美地克服了傳統抗體的開發周期長，穩定性低，保存條件苛刻等缺陷。這種分子量僅為常規抗體1/10的納米抗體逐漸成為新一代抗體診斷及治療中的新興力量。因此應用納米抗體技術研發CD47治療性抗體藥物具有廣闊的前景。

發明內容

發明目的：本發明提供一種針對CD47胞外段的納米抗體，該納米抗體能夠阻斷CD47與其配體SIRPa的相互作用，同時提供該納米抗體及其衍生物的編碼序列、制備方法、及在診斷治療中的用途。

本發明的第一方面，提供了一種抗CD47納米抗體的VHH鏈，所述VHH鏈包括互補決定區CDR，所述的互補決定區CDR包括SEQ ID NO.:5所示的CDR1，SEQ ID NO.:6所示的CDR2，和SEQ ID NO.:7所示的CDR3(或由CDR1、CDR2和CDR3構成)。

在另一優選例中，所述CD47為人CD47。