[發(fā)明專利]阻斷型CD47納米抗體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710472025.5
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN109096395B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設計）人: 安康;安文琪;馬小偉;范蓓;張寶獻;潘若文
• 申請（專利權）人: 華蘭生物工程股份有限公司;華蘭基因工程有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種抗CD47納米抗體的VHH鏈，其特征在于，所述VHH鏈包括互補決定區(qū)CDR，所述的互補決定區(qū)CDR包括SEQ ID NO：5所示的CDR1，SEQ ID NO：6所示的CDR2，和SEQ ID NO：7所示的CDR3。

2.如權利要求1所述的VHH鏈，其特征在于，所述VHH鏈還包括框架區(qū)FR，所述的框架區(qū)FR由SEQ ID NO：1所示的FR1，SEQ ID NO：2所示的FR2，SEQ ID NO：3所示的FR3，和SEQ IDNO：4所示的FR4組成。

3.如權利要求1所述的VHH鏈，其特征在于，所述的抗CD47納米抗體的VHH鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

4.一種抗CD47納米抗體，其特征在于，它是針對CD47表位的納米抗體，并且具有如SEQID NO:8中所示的氨基酸序列的VHH鏈。

5.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼選自下組的蛋白質(zhì)：權利要求1所述的抗CD47納米抗體的VHH鏈、或權利要求4所述的抗CD47納米抗體。

6.如權利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，具有如SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。

7.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體含有權利要求5所述的多核苷酸。

8.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求7所述的表達載體，或其基因組中整合有權利要求5所述的多核苷酸。

9.一種產(chǎn)生抗CD47納米抗體的方法，其特征在于，包括步驟：(a)在適合產(chǎn)生納米抗體的條件下，培養(yǎng)權利要求8所述的宿主細胞，從而獲得含所述抗CD47納米抗體的培養(yǎng)物；以及(b)從所述培養(yǎng)物中分離或回收所述的抗CD47納米抗體。

10.一種免疫偶聯(lián)物，其特征在于，該免疫偶聯(lián)物含有：

(a)如權利要求1所述的抗CD47納米抗體的VHH鏈、或如權利要求4所述的抗CD47納米抗體；和(b)選自下組的偶聯(lián)部分：可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、或酶。

11.如權利要求10所述的免疫偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)物選自：熒光或發(fā)光標記物、放射性標記物、MRI或CT造影劑、或能夠產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的酶、放射性核素、生物毒素、細胞因子、抗體、抗體Fc片段、抗體scFv片段、病毒顆粒、脂質(zhì)體、前藥激活酶、化療劑或任何形式的納米顆粒。

12.如權利要求10所述的免疫偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)物選自：金納米顆粒/納米棒或納米磁粒。

13.權利要求4所述的抗CD47納米抗體的用途，其特征在于，用于制備用于檢測CD47分子的試劑。

14.一種重組蛋白，其特征在于，所述的重組蛋白具有：

(i)如權利要求1所述的重鏈可變區(qū)VHH的序列或如權利要求4所述的納米抗體的序列；以及

(ii)任選的協(xié)助表達和/或純化的標簽序列。

15.如權利要求1所述的VHH鏈、如權利要求4所述的納米抗體、或權利要求10所述的免疫偶聯(lián)物的用途，其特征在于，用于制備試劑、檢測板或試劑盒；

其中，所述試劑、檢測板或試劑盒用于：檢測樣品中CD47蛋白。

16.一種體外非診斷性檢測樣品中CD47蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(1)將樣品與權利要求4所述的納米抗體接觸；

(2)檢測是否形成抗原-抗體復合物，其中形成復合物就表示樣品中存在CD47蛋白。