[發(fā)明專利]凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記及其特異性引物和檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710471855.6
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107287296B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任春華;江曉;黃文;陳廷;胡超群
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的特異性引物，其特征在于：所述的EST-SSR標記編號為Lv-F056，所述的Lv-F056的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述的EST-SSR標記Lv-F056的特異性引物如下所示：

Lv-F056-F：5’-GTGTGTATTCCATGTTGCGTATG-3’；

Lv-F056-R：5’-CGATGAAAAACCATTGATTTAGG-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的特異性引物，其特征在于，所述的特異性引物的正向引物的5’端標記有熒光基團。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的特異性引物，其特征在于，所述的熒光基團為FAM、HEX或TAMRA。

4.一種凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）、提取凡納濱對蝦基因組DNA；

（2）、以步驟（1）提取的基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求2所述的針對位點Lv-F056的引物對Lv-F056-F/R進行PCR擴增；

（3）、利用測序儀對PCR擴增產(chǎn)物進行分型。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的檢測方法，其特征在于，所述的步驟（2）中的PCR擴增，其反應(yīng)體系為：25 μL，包括：不含Mg²⁺的10×PCR buffer 2.5μL，25 mM MgCl₂ 2.0 μL，10 mM dNTP 0.5 μL，5 U/μL高保真PCR酶0.2 μL，10 μM 正向引物0.5 μL，10 μM 反向引物0.5 μL，25 ng/μL DNA模板0.5 μL，ddH₂O 18.3 μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的凡納濱對蝦功能基因EST-SSR標記的檢測方法，其特征在于，所述的步驟（2）中的PCR擴增，其反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性30秒，按權(quán)利要求2所述的EST-SSR標記的特異性引物的退火溫度退火30秒，72℃延伸30秒，共35個循環(huán)；72℃再延伸6分鐘；所述的EST-SSR標記的特異性引物的退火溫度為：位點Lv-F056：55℃。