[發明專利]一種HCV重組融合抗原及其應用

有效

• 申請號: 201710470748.1
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107129539B
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 干盈盈;王磊;李嵐敏;張兵;何濤;龍騰鑲
• 申請（專利權）人: 四川邁克生物新材料技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;G01N33/68;G01N33/569
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本發明涉及體外檢測診斷試劑，具體公開了一種用于檢測HCV的重組融合抗原，由Core抗原(2?102aa)、柔性連接子和NS5抗原(2322?2422aa)構成。本發明經過對核衣殼蛋白抗原區域的優化，去除C端多余氨基酸，選擇2?102aa抗原區域，降低假陽率而不損害靈敏度。并且在核衣殼蛋白的基礎上添加非結構蛋白NS5的2322?2422aa氨基酸區域，使所提供的融合抗原具有很高的靈敏度、很強的特異性以及良好的熱穩定性。

技術領域

本發明涉及體外檢測診斷試劑，具體地說，涉及一種用于檢測HCV的重組融合抗原。

背景技術

丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus，HCV)感染是重大的健康問題，全球的平均感染率約為3％。超過75％的急性感染個體最終發展成慢性攜帶狀態，最終導致肝硬化、肝功能衰竭和肝癌。丙型肝炎病毒主要通過血液傳播，占輸血后肝炎的80-90％。目前HCV感染的治療方法是干擾素和利巴韋林藥物聯合用藥，但該治療方法并不是在所有情況下都有效。由于目前沒有丙型肝炎的有效治療藥物，盡早發現HCV感染，準確判斷病毒亞型及患者感染狀況，是防控丙型肝炎的重要手段。因此，利用靈敏度高、特異性強、穩定性好的診斷試劑對血源及血液制品等執行嚴格HCV篩查程序，對有效防控丙型肝炎起重要作用。

HCV病毒屬于黃病毒科的肝炎病毒屬，其基因組為9.6kb的正義、單鏈RNA，編碼一個3011個氨基酸的多蛋白前體。多蛋白前體在宿主及病毒自身蛋白酶的作用下，被切割成多個功能蛋白，包括3種結構蛋白，即核衣殼蛋白Core，囊膜糖蛋白E1和囊膜糖蛋白E2；以及6種非結構蛋白，即NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B。

自1989年HCV被發現以來，國際HCV診斷試劑已經發展到了第三代。第一代抗-HCVELISA診斷試劑采用的抗原是C100-3，C100-3是HCV非結構基因(NS3/NS4)和人超氧化物歧化酶(SOD)基因嵌合后表達的融合蛋白，全長為527個氨基酸，其中C100占363個氨基酸，SOD占154個氨基酸。應用C100-3對獻血員進行HCV篩查后，輸血后丙型肝炎發病率下降84％。但第一代抗體有幾點不足:1、靈敏度低，有假陰性；2、特異性低，易出現假陽性；3、不能作為傳染性的指標。僅17～25％的抗C100-3陽性的血制品可以傳播HCV；4、不宜用于急性丙型肝炎的早期診斷，由于抗C100出現較晚，輸血后獲得性丙型肝炎病人抗C100-3抗體陽性的平均時間為18周。為彌補第一代試劑的不足，又發展了第二代抗-HCV ELISA診斷試劑。第二代抗-HCV ELISA診斷試劑包含HCV核衣殼區重組蛋白C22-3和非結構蛋白NS3區重組蛋白C33C抗原。第二代抗-HCV ELISA診斷試劑，在HCV感染高危人群(如腎透析病人，靜脈毒品成癮者和血友病患者)中，抗HCV檢出率較第一代高5～40％；在急性輸血后丙型肝炎和散發性丙型肝炎中，抗HCV檢出率高于第一代約20％以上，在慢性丙型肝炎中，抗HCV檢出率較第一代增加10％以上。此外，HCV患者血清轉換的窗口期從第一代抗-HCV ELISA診斷試劑的18周縮減為10周。但第二代抗-HCV ELISA診斷試劑仍存在假陽性問題和少數漏檢問題。1996年FDA批準了第三代抗-HCV ELISA試劑，與第二代抗-HCV ELISA試劑相比，增加了HCV NS5區作為包被抗原，可檢出單獨NS5抗體陽性者，使特異性達到99％。