[發明專利]一種植物細胞原生質體純化儀及純化方法

有效

• 申請號: 201710469421.2
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107058075B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 梁峰;梁梁;劉秀花
• 申請（專利權）人: 商丘師范學院
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12M1/00;C12N5/04
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

技術領域

本發明屬于植物細胞原生質體分離純化技術領域，具體涉及一種植物細胞原生質體純化儀及純化方法。

背景技術

植物細胞原生質體是指將植物細胞壁去除后的原生質團，在適宜的滲透液中保持球型的細胞。目前原生質體在植物細胞工程中占據很重要的位置，不但是植物細胞雜交的良好親本，還是植物遺傳工程的理想受體是細胞生物學研究的重要材料。植物細胞原生質體分離是達到這些目的的重要技術基礎。

傳統的原生質體純化方法有自然沉降法、密度梯度離心法。自然沉降法將過濾和沉降相結合，酶解液濾網過濾后置于試管內，組織碎片、未去壁細胞、原生質體和葉綠體等細胞器在重力作用下下降速度不同，根據經驗吸取原生質體較多的懸浮液以獲得原生質的純化；離心漂浮法是將酶解液置于離心管內，再將高滲溶液加至離心管底部(如25％蔗糖溶液)，在酶解液和高滲溶液之間形成一個界面，再通過一定速度的水平離心，組織碎片、未完全去壁的細胞破碎的細胞體沉于離心管底部，完好的原生質體集中在高滲上層和酶解液之間的界面上，細胞器如葉綠體則仍留在酶解液中，小心吸取原生質體液層以獲得純化。

然而傳統的自然沉降法、密度梯度離心法等繁瑣，損壞嚴重，得率低，且通過密度梯度離心的對原生質體的破壞較大，得率低。有必要開發一種步驟簡化、得率高的原生質體純化裝置。

發明內容

本發明提供的一種植物細胞原生質體純化儀及純化方法，解決了傳統的自然沉降法、密度梯度離心法等繁瑣，損壞嚴重，得率低，且通過密度梯度離心的對原生質體的破壞較大，得率低的問題。

本發明的目的是提供一種植物細胞原生質體純化儀及純化方法，包括電泳池，所述電泳池內從上到下依次劃分為加樣室、滴漏室和電泳室，所述滴漏室為漏斗形狀，所述加樣室與所述滴漏室連通、并且所述滴漏室上端與所述加樣室通過濾膜隔開，所述電泳室的左側設置有負電極，右側設置有正電極，所述電泳室的底部從左至右分別連通有細胞碎片收集盤、原生質體收集盤和葉綠體收集盤，所述細胞碎片收集盤位于所述滴漏室的下方，所述葉綠體收集盤靠近所述正電極設置，所述電泳室內還縱向設置有濾網，所述濾網位于原生質體收集盤的右側壁上方。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述濾膜的孔徑φ為50-100微米。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述濾膜擱置在滴漏室上端端口處。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述濾網的孔徑φ為10微米。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述電泳室的上端靠近所述正電極處開設有濾網插孔，并且電泳室的兩個相對的側壁上分別開設有濾網滑槽，所述濾網的寬度小于所述濾網插孔的長度，所述濾網的厚度小于所述濾網插孔的寬度，并且所述濾網的兩側與兩個濾網滑槽一一對應滑動連接。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述電泳池的外部還設置有直流電泳儀，并且所述直流電泳儀的負極與所述負電極電連接，正極與所述正電極電連接。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述細胞碎片收集盤、所述原生質體收集盤和所述葉綠體收集盤均可拆卸的連接在所述電泳室的底部，具體結構為：所述電泳室的底部從左至右分別連通有細胞碎片流通管、原生質體收流通管和葉綠體流通管，所述細胞碎片收集盤的開口端與所述細胞碎片流通管底部螺接，所述原生質體收集盤的開口端與所述原生質體收流通管底部螺接，所述葉綠體收集盤的開口端與所述葉綠體流通管底部螺接。

優選的，所述的植物細胞原生質體純化儀中，所述細胞碎片收集盤與所述細胞碎片流通管之間、所述原生質體收集盤與所述原生質體收流通管之間，所述葉綠體收集盤與所述葉綠體流通管之間均設置有密封圈。

本發明還提供了一種所述的植物細胞原生質體純化儀的純化方法，包括以下步驟：

S1，電泳室(3)內裝滿0.5mol/L的甘露醇緩沖液，將直流電泳儀(7)的電場強度調節在1.5-5v/cm，進行電泳；

S2，電泳開始后，將制備好的原生質體混合物懸浮液按照6-12滴/分鐘的速度滴加入加樣室(1)內直至滴加完畢，然后繼續電泳30min；

S3，關閉電源，收集原生質體收集盤(5)內的原生質體。

與現有技術相比，本實用發明提供的一種植物細胞原生質體純化儀及純化方法，具有以下有益效果：