[發明專利]一種純化分離西曲瑞克的方法

在審

• 申請號: 201710468205.6
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107312073A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 劉志國;陳曉航;李雪豪
• 申請（專利權）人: 浙江湃肽生物有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/20
• 代理公司: 杭州華知專利事務所33235
• 代理人: 趙梅

1.一種純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、將西曲瑞克粗品溶解于乙腈水溶液中，超聲處理，濾膜過濾，得到粗品溶液待用；

步驟2、使用高效液相色譜法對粗品溶液進行分離純化：色譜柱為反相色譜柱，流動相A為磷酸二氫鈉水溶液，流動相B為乙腈；用流動相A平衡反相色譜柱后，將粗品溶液載入到反相色譜柱中，采用梯度洗脫分離純化；

步驟3、將分離純化后，純度達99.5％以上目的肽溶液于水溫不超過38℃下進行減壓旋蒸濃縮，得到濃縮液待用；

步驟4、用醋酸水溶液平衡反相色譜柱后，將濃縮液上樣至反相色譜柱中，用醋酸水溶液/乙腈體系進行轉鹽；

步驟5、轉好醋酸鹽且純度99.5％以上目的肽溶液于水溫不超過38℃下進行減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥，得到粉末狀西曲瑞克產品。

2.根據權利要求1所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟2流動相A為質量濃度0.03wt％～6.0wt％的磷酸二氫鈉水溶液，并用磷酸調pH至2.5～4.5。

3.根據權利要求1所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟2流動相A為質量濃度0.2wt％～0.8wt％的磷酸二氫鈉水溶液，并用磷酸調pH至3.0～4.0。

4.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟2按體積分數設置流動相梯度，0到60分鐘A：B由80～65：20～35到40～25：60～75。

5.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟1中西曲瑞克粗品純度不低于80％，脫酰胺西曲瑞克雜質含量不高于5％，乙酰化西曲瑞克雜質含量不高于1.5％。

6.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟1中乙腈水溶液為20-40v/v％乙腈水溶液。

7.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟1中用孔徑為0.45μm濾膜過濾。

8.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，反相色譜柱內的固定相為C18或C8反相填料。

9.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，步驟4用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液平衡反相色譜柱后，將濃縮液上樣至反相色譜柱中，用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液沖洗柱子3個柱體積；再用50％的乙腈和50％的0.05～1.0v/v％醋酸水溶液洗脫，收集洗脫液即轉好醋酸鹽的肽溶液。

10.根據權利要求1或2或3所述的純化分離西曲瑞克的方法，其特征在于，平衡、洗脫、沖洗反相色譜柱的流速根據反相色譜柱的規格進行設定，2*25cm反相色譜柱采用5～20ml/min的流速，其它規格的反相色譜柱流速線性放大。