[發(fā)明專利]一種純化分離西曲瑞克的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710468205.6
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107312073A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉志國;陳曉航;李雪豪
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江湃肽生物有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/20
• 代理公司: 杭州華知專利事務(wù)所33235
• 代理人: 趙梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種純化分離西曲瑞克的方法。

背景技術(shù)

西曲瑞克是一種合成的10肽，是一種有效的黃體酮釋放激素抑制素(LHRH)受體拮抗劑，它能控制卵巢的刺激作用，預(yù)防不成熟卵泡過早排出，幫助受孕。并可用于治療乳腺癌和婦科癌，子宮內(nèi)膜異位癥、性早熟、子宮肌瘤、卵巢雄激素過多和經(jīng)前綜合癥。由于西曲瑞克的自身物理性質(zhì)而易被胃腸道中的酵素分解破壞，不能通過口服使用，因此常作注射用西曲瑞克制劑，通過皮下或肌肉注射吸收，迅速發(fā)揮作用。

西曲瑞克的序列如下：

Ac-D-2-Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2

目前尚未有西曲瑞克純化方法的專利或文獻(xiàn)，但從西曲瑞克的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看，毒性雜質(zhì)：脫酰胺西曲瑞克和乙酰化西曲瑞克雜質(zhì)是產(chǎn)品純度控制的關(guān)鍵點。

在生產(chǎn)西曲瑞克的過程中，我們也發(fā)現(xiàn)脫酰胺西曲瑞克雜質(zhì)和乙酰化西曲瑞克雜質(zhì)比較難分離，嚴(yán)重影響產(chǎn)品收率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種純化分離西曲瑞克的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種純化分離西曲瑞克的方法，包括如下步驟：

步驟1、將西曲瑞克粗品溶解于乙腈水溶液中，超聲處理，濾膜過濾，得到粗品溶液待用；

步驟2、使用高效液相色譜法對粗品溶液進(jìn)行分離純化：色譜柱為反相色譜柱，流動相A為磷酸二氫鈉水溶液，流動相B為乙腈；用流動相A平衡反相色譜柱后，將粗品溶液載入到反相色譜柱中，采用梯度洗脫分離純化；

步驟3、將分離純化后，純度達(dá)99.5％以上目的肽溶液于水溫不超過38℃下進(jìn)行減壓旋蒸濃縮，得到濃縮液待用；

步驟4、用醋酸水溶液平衡反相色譜柱后，將濃縮液上樣至反相色譜柱中，用醋酸水溶液/乙腈體系進(jìn)行轉(zhuǎn)鹽；

步驟5、轉(zhuǎn)好醋酸鹽且純度99.5％以上目的肽溶液于水溫不超過38℃下進(jìn)行減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥，得到粉末狀西曲瑞克產(chǎn)品。

進(jìn)一步地，步驟2流動相A為質(zhì)量濃度0.03wt％～6.0wt％的磷酸二氫鈉水溶液，并用磷酸調(diào)pH至2.5～4.5。

進(jìn)一步地，步驟2流動相A為質(zhì)量濃度0.2wt％～0.8wt％的磷酸二氫鈉水溶液，并用磷酸調(diào)pH至3.0～4.0。

進(jìn)一步地，步驟2按體積分?jǐn)?shù)設(shè)置流動相梯度，0到60分鐘A：B由80～65：20～35到40～25：60～75。

進(jìn)一步地，步驟1中西曲瑞克粗品純度不低于80％，脫酰胺西曲瑞克雜質(zhì)含量不高于5％，乙酰化西曲瑞克雜質(zhì)含量不高于1.5％。

進(jìn)一步地，步驟1中乙腈水溶液為20-40v/v％乙腈水溶液。

進(jìn)一步地，步驟1中用孔徑為0.45μm濾膜過濾。

進(jìn)一步地，反相色譜柱內(nèi)的固定相為C18或C8反相填料。

進(jìn)一步地，步驟4用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液平衡反相色譜柱后，將濃縮液上樣至反相色譜柱中，用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液沖洗柱子3個柱體積；再用50％的乙腈和50％的0.05～1.0v/v％醋酸水溶液洗脫，收集洗脫液即轉(zhuǎn)好醋酸鹽的肽溶液。

進(jìn)一步地，平衡、洗脫、沖洗反相色譜柱的流速根據(jù)反相色譜柱的規(guī)格進(jìn)行設(shè)定，2*25cm反相色譜柱采用5～20ml/min的流速，其它規(guī)格的反相色譜柱流速線性放大。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明采用反相C18或C8柱、磷酸二氫鈉緩沖體系(pH＝2.5-4.5)進(jìn)行純化分離。此純化方法能有效分離西曲瑞克中的毒性雜質(zhì)：脫酰胺雜質(zhì)和乙酰化西曲瑞克雜質(zhì)。本發(fā)明可有效解決現(xiàn)有技術(shù)中由于脫酰胺雜質(zhì)和乙酰化西曲瑞克雜質(zhì)未有效分離而存在收率低的難題，大大提高西曲瑞克的純化收率，收率高達(dá)45％，降低生產(chǎn)成本。且所得西曲瑞克產(chǎn)物純度高達(dá)99.5％。本發(fā)明方法只需要一次過柱即可同時分離西曲瑞克產(chǎn)品中的毒性雜質(zhì)：脫酰胺西曲瑞克和乙酰西曲瑞克雜質(zhì)，控制雜質(zhì)含量小于0.1％，有效提高西曲瑞克產(chǎn)品的安全性。獲得的西曲瑞克不僅純度高，而且收率好，達(dá)到工業(yè)化生成的要求，具有良好的經(jīng)濟(jì)價值和廣泛的應(yīng)用前景。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做更進(jìn)一步地解釋。下列實施例僅用于說明本發(fā)明，但并不用來限定本發(fā)明的實施范圍。

一種純化分離西曲瑞克的方法，包括如下步驟：