[發明專利]草酸脫羧酶的制備及其制品和應用

在審

• 申請號: 201710467815.4
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107868775A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 宋保平;劉海峰;陳火晴;陳先橋;童佩;汪小鋒
• 申請（專利權）人: 武漢康復得生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N1/14;A23L31/00;A23L33/10;A23K10/30;A23K20/189;A61K38/51;A61P13/04;A61P13/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司11228
• 代理人: 程殿軍,張瑾

1.一種草酸脫羧酶的制備方法，其特征在于，所述方法使用生物發酵技術手段，在0.001-50mM錳離子條件下，采用酸誘導表達，生產草酸脫羧酶。

2.權利要求1所述方法，其特征在于，生產草酸脫羧酶用的菌種來源于田頭菇屬食用菌。

3.權利要求2所述方法，其特征在于，生產草酸脫羧酶用的菌種為茶樹菇、楊樹菇、田頭菇、半圓田頭菇和/或楊柳田頭菇。

4.權利要求1所述方法，其特征在于：誘導產酶時調節發酵液pH值到pH值3.2～4.0、pH值3.0～3.6、pH值2.8～3.2、pH值2.6～3.0或pH值2.0～2.8；調節發酵液pH值用的酸為有機酸或無機酸。

5.權利要求1所述方法，其特征在于：誘導產酶時加入的含錳離子的物質包括MnCl₂、MnSO₄、MnCO₃、Mn(NO₃)₂和/或Mn(CH₃COO)₂；加入的錳離子的濃度為0.001～0.1mM、0.1～1mM、1～2mM、2～4mM、4～6mM、6～10mM或10～50mM。

6.權利要求1所述的草酸脫羧酶的制備方法，其特征在于：誘導產酶時補加補料培養基，補料培養基成分含有谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸或者谷胱甘肽物質。

7.權利要求1所述方法，其特征在于：生產用的發酵罐類型為機械攪拌發酵罐或氣升式發酵罐。

8.權利要求1所述方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

當菌體液體發酵培養生長到固形物含量達到5～30％時，以每小時降低0.05～1個pH值單位的速率，緩慢調節發酵液pH值到pH值2.0～4.0之間，同時加入含錳離子的物質，進行誘導產酶生產3～15天,產酶結束后，分別收集發酵液與菌絲體。

9.權利要求8所述方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

1)以田頭菇屬真菌為菌種，采用液體發酵培養，種子培養基為：酵母粉，2～4g/L；大豆蛋白胨，1～3g/L；KH₂PO₄，0.5～3g/L；MgSO₄·7H₂O，0.2～2g/L；CaCl₂，0.1～1g/L；葡萄糖，10～30g/L；玉米淀粉，10～30g/L；維生素B₁ 5～20mg/L；調節培養基pH值為5.0～6.0；種子液培養條件為：23～28℃，100rpm～350rpm，培養2～5天；

2)將種子液菌絲球接種至發酵罐進行發酵培養，發酵培養基成分如下：酵母粉，4～8g/L；大豆蛋白胨，2～6g/L；KH₂PO₄，0.5～3g/L；Na₂HPO₄,0.1～1g/L；MgSO₄·7H₂O，0.2～2g/L；CaCl₂，0.1～1g/L；葡萄糖，10～30g/L；蔗糖，10～30g/L；玉米淀粉5～20g/L；維生素B₁ 5～20mg/L，調節培養基的pH值為4.5-6.5；培養溫度為23～28℃，接種后培養3～5天；

3)當菌體生長到固形物含量達到5～30％時，以每小時降低0.05～1個pH值單位的速率，緩慢調節發酵液pH值到2.0～4.0之間，同時加入含錳離子的物質，進行誘導產酶生產3～15天,產酶結束后，分別收集發酵液與菌絲體。

4)發酵液經濃縮、純化，脫除小分子物質后干燥成粉，即為含草酸脫羧酶的酶粉；菌絲體經過濾，洗滌，干燥，粉碎步驟制成細粉，即為含草酸脫羧酶的食用菌粉。