[發明專利]一種重組短短芽孢桿菌的構建方法在審
| 申請號： | 201710467689.2 | 申請日： | 2017-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN109055418A | 公開（公告）日： | 2018-12-21 |
| 發明（設計）人： | 曹遠東;曾二生;潘烘;周志;張燕 | 申請（專利權）人： | 江西嘉博生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/75 | 分類號： | C12N15/75;C12N15/27;C12N15/66;C12N1/21 |
| 代理公司： | 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115 | 代理人： | 謝德珍 |
| 地址： | 332600 江西省九江*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 短短芽孢桿菌 質粒 粒細胞巨噬細胞集落刺激因子 連接反應 雙酶切 構建 基因 瓊脂糖凝膠電泳回收 復蘇 新霉素抗性 酶切產物 轉化產物 電轉化 轉化子 電轉 溫箱 搖床 合成 篩選 回收 | ||
【權利要求書】：
1.一種重組短短芽孢桿菌的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
合成豬粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（Porcine GM-CSF）基因與短短芽孢桿菌（pNY326）質粒；
用BamHI和EcoRI分別對Porcine GM-CSF基因和pNY326質粒進行雙酶切，于37℃溫箱反應3h；
使用1.2 %瓊脂糖凝膠電泳回收Porcine GM-CSF基因和pNY326質粒的酶切產物，并將回收的雙酶切產物進行4℃過夜連接反應；
將連接反應產物直接電轉化短短芽孢桿菌SP3，電轉完成后進行30℃搖床80rpm緩慢復蘇1h；
將復蘇好的轉化產物用新霉素抗性篩選轉化子，獲得重組短短芽孢桿菌。
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