[發(fā)明專(zhuān)利]從魚(yú)鱗中同時(shí)提取并分離活性成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710462868.7
• 申請(qǐng)日: 2017-06-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107286352B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉曉燕;呂金順;呂培林;張曉盼;王琳雙
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 淮陰師范學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C08H1/00
• 分類(lèi)號(hào): C08H1/00;C07D473/18;C07K14/78
• 代理公司: 淮安市科翔專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 32110
• 代理人: 韓曉斌

1.從魚(yú)鱗中同時(shí)提取并分離活性成分的方法，以魚(yú)鱗為原料，將魚(yú)鱗中的鳥(niǎo)嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白同時(shí)進(jìn)行提取，再控制提取液的濃度和酸度及溫度，依次將膠原蛋白、鳥(niǎo)嘌呤和膠原蛋白肽進(jìn)行分離；其特征是它的具體步驟如下: 對(duì)洗凈和除雜質(zhì)的魚(yú)鱗經(jīng)過(guò)冷凍干燥后，粉碎成絲狀魚(yú)鱗；將絲狀魚(yú)鱗按照一定的固液比與提取溶劑混合后，置于超聲裝置中，在設(shè)置的超聲功率、溫度和超聲時(shí)間下進(jìn)行提取，離心分離去不溶物，得含有鳥(niǎo)嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液；將混合提取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置中進(jìn)行濃縮得到濃縮液；濃縮液置于低溫下靜置至出現(xiàn)沉淀和清液后，過(guò)濾得到沉淀A和清液B；沉淀A用去離子水洗滌至無(wú)氯離子后冷凍干燥得白色物C；將清液B通過(guò)堿性溶液調(diào)節(jié)至一定pH值后，在低溫下靜置一定時(shí)間，過(guò)濾及用去離子水洗滌至無(wú)氯離子后得到白色沉淀D和澄清溶液E，白色沉淀D被冷凍成白色粉末狀D；澄清溶液E繼續(xù)用堿性溶液調(diào)節(jié)至一定pH值后，濃縮，在低溫下靜置一定時(shí)間，過(guò)濾分離得沉淀F和濾液G，沉淀F經(jīng)洗滌、冷凍干燥后為無(wú)色物F，濾液G被濃縮后直接冷凍干燥得白色粉末G；白色物C、白色粉末狀D的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致，且不溶于水，易溶于鹽酸，證明兩種物為膠原蛋白；無(wú)色物F的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥(niǎo)嘌呤基本一致，不溶于水，證明為不純的鳥(niǎo)嘌呤；白色粉末G極易溶于水，也極易溶于酸，紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致，標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽；

所述 混合提取液的提取過(guò)程是：將絲狀魚(yú)鱗按照質(zhì)量數(shù)與0.050～0.82 mol/L濃度的鹽酸溶液體積按照1g:10~19mL比混合后，置于超聲裝置中，功率35～71%、時(shí)間20~40分鐘和溫度30 ℃ 進(jìn)行提??；離心分離去不溶物，得含有鳥(niǎo)嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液；

所述的濃縮過(guò)程是：混合提取液6000 r/min離心20min，得濾液，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液；

所述膠原蛋白的分離是：濃縮液置于0 ℃ ~10 ℃ 靜置過(guò)夜后，過(guò)濾分離，得到沉淀A和清液B；沉淀A用去離子水洗滌至無(wú)氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物C；清液B用0.5~1mol/L 的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.0~6.5后，同樣是在0 ℃ ~10 ℃ 低溫靜置過(guò)夜后，通過(guò)定量濾紙過(guò)濾及去離子水洗滌，得到白色沉淀D和澄清溶液E，白色沉淀D被冷凍成白色粉末狀D；白色物C、白色粉末狀D的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致，且不溶于水，易溶于鹽酸，證明兩種物為膠原蛋白；

所述鳥(niǎo)嘌呤的分離是：通過(guò)定量濾紙過(guò)濾白色沉淀D后所得的澄清溶液E用0.05~0.2mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為7.0-7.5后，濃縮，在0℃ ~10℃ 低溫靜置過(guò)夜至有清液和沉淀，過(guò)濾分離得沉淀F和濾液G，沉淀F經(jīng)水洗滌，冷凍干燥后為無(wú)色物F；無(wú)色物F的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥(niǎo)嘌呤基本一致，不溶于水，證明為不純的鳥(niǎo)嘌呤；

所述膠原蛋白肽的分離是：過(guò)濾分離得沉淀F后的濾液G，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)水蒸出，再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末G；白色粉末G極易溶于水，也極易溶于酸，紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致，標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從魚(yú)鱗中同時(shí)提取并分離活性成分的方法，其特征是： 所用的魚(yú)鱗為海魚(yú)、淡水魚(yú)的魚(yú)鱗或兩種魚(yú)鱗的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從魚(yú)鱗中同時(shí)提取并分離活性成分的方法，其特征是 所述的洗凈和去雜質(zhì)的魚(yú)鱗是指：將市場(chǎng)所購(gòu)置的魚(yú)鱗，用水洗滌至無(wú)血色和洗滌水溶液無(wú)渾濁物，不做其他任何處理，直接進(jìn)行冷凍干燥，粉碎成絲狀魚(yú)鱗。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從魚(yú)鱗中同時(shí)提取并分離活性成分的方法，其特征是所述 混合提取液的優(yōu)化的提取過(guò)程是：絲狀魚(yú)鱗質(zhì)量與鹽酸體積比為1g：16.6mL，HCl濃度0.33mol/L，超聲功率57%，提取時(shí)間28min，提取溫度為30 ℃ 。