[發(fā)明專利]一種茶樹組培快繁體系的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710462653.5
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107232056B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鮑露;谷星;肖斌;郭莎莎;高岳芳
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 西安長和專利代理有限公司 61227
• 代理人: 黃偉洪

1.一種茶樹組培快繁體系的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

外植體選擇，3-5月期間采自溫室?guī)в酗枬M腋芽的當年生半木質(zhì)嫩枝；

初代培養(yǎng)：‘ 陜茶1號’ 的初代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA₃3.0mg/L+PVP 4.0mg/L；‘安吉黃茶’最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1mg/L+GA₃3.0mg/L+PVP 4.0mg/L；

繼代培養(yǎng)：‘ 陜茶1號’ 繼代培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+IBA 0.1mg/L+6-BA 3.0mg/L+GA₃1.0mg/L；‘安吉黃茶’：MS+TDZ 0.02mg/L+IBA 0.1mg/L；繼代4～5次的組培苗轉(zhuǎn)到壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

壯苗培養(yǎng)：‘陜茶1號’繼代苗轉(zhuǎn)至MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L+GA₃ 1.0mg/L；‘安吉黃茶’轉(zhuǎn)至MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.01mg/L的壯苗培養(yǎng)基培養(yǎng)20天有助于茶苗的葉片展開與伸長；

生根培養(yǎng)：‘陜茶1號’生根方法為1000mg/L IBA浸泡，茶苗基部1min后接種至不添加任何植物激素的1/2MS空白培養(yǎng)基中；‘安吉黃茶’生根培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.2mg/L+IBA 0.1mg/L。

2.如權(quán)利要求1所述的茶樹組培快繁體系的建立方法，其特征在于，用洗潔精清洗表面，用自來水沖洗5小時；在無菌室內(nèi)用75％酒精浸沒20-40秒；用35％的次氯酸鈉溶液浸泡10-15分鐘；用無菌水沖洗4-5次，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。

3.如權(quán)利要求1所述的茶樹組培快繁體系的建立方法，其特征在于，無菌室內(nèi)消毒具體包括：

用紫外燈照射30-45分鐘；

地面用低濃度的來蘇爾溶液消毒；

超凈工作臺消毒，開啟無菌風開關(guān)；

用75％的酒精棉球擦凈工作臺，接種時先點燃酒精燈，鑷子和剪刀先浸泡在75％的酒精溶液中。

4.如權(quán)利要求1所述的茶樹組培快繁體系的建立方法，其特征在于，培養(yǎng)中的植物生長調(diào)節(jié)劑包括：稱取6-BA，溶于HCl中，用蒸餾水容，使最終濃度為0.5mg/L；TDZ和NAA分別溶于NaOH中，用蒸餾水定容，使最終濃度分別0.01mg/L和0.1mg/L；IBA、GA₃溶于酒精中，蒸餾水定容，使終濃度分別為0.1mg/L、1mg/L；配制好的植物生長調(diào)節(jié)劑存于植物棕色瓶中，4℃冰箱保存。

5.如權(quán)利要求1所述的茶樹組培快繁體系的建立方法，其特征在于，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配制、分裝與滅菌包括：

(1)量取所配培養(yǎng)基總體積的2/3體積的蒸餾水，加入4.43gMS干粉，30g蔗糖，7～8g瓊脂，4gPVP，依次加入植物激素；

(2)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，用pH計或pH試紙測定；

培養(yǎng)基的pH按照培養(yǎng)材料分別用1mol/LNaOH溶液、1mol/L HCl溶液來調(diào)節(jié)所配制培養(yǎng)基的pH值；

(3)滅菌；加熱至沸騰，將配制并加熱好的培養(yǎng)基分別裝在事先洗凈的三角瓶，用封口膜封口，注明標簽；然后和用牛皮紙或報紙包好的培養(yǎng)皿及用三角瓶裝好的蒸餾水一道進行高壓滅菌；，采用全自動高壓滅菌鍋，待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋，在98kPa、121.3℃下，滅菌21min；

(4)分裝；滅菌后取出培養(yǎng)基，在超凈工作臺中向培養(yǎng)基中依次加入經(jīng)細菌過濾器過濾后的植物激素，混勻后分裝備用。