[發明專利]一種基于質譜的N-糖鏈相對定量的方法

有效

• 申請號: 201710460611.8
• 申請日: 2017-06-18
• 公開（公告）號: CN109142506B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 陸豪杰;張瑩;楊麗君
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N1/38;G01N1/42
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種基于質譜的N-糖鏈相對定量的方法，其特征在于，該方法為苯胺功能化的DOTA(S-2-(4-氨基芐基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷四乙酸)標記N-糖鏈再螯合稀土金屬離子的相對定量的方法，其中，選用苯胺功能化的DOTA對糖鏈進行衍生，然后在利用DOTA與不同的稀土金屬離子Ho³⁺/Lu³⁺螯合實現質量差標簽的引入，從而實現相對定量；

其包括步驟：

(1)在糖鏈的凍干樣品中，按順序加入苯胺功能化的DOTA，還原劑氰基硼氫化鈉混合，反應結束后凍干樣品；

(2)分別向標記上DOTA的糖鏈中加入LuCl₃或者HoCl₃，反應完后混合除鹽；

(3)進行MALDI質譜分析；

所述的方法中，苯胺功能化的DOTA與糖鏈的反應中，苯胺功能化的DOTA與糖鏈先在37℃孵育1小時后，再加入還原劑氰基硼氫化鈉進行還原胺化反應，反應溫度為37℃，反應時間為2小時，還原劑氰基硼氫化鈉的終濃度是5mg/ml，反應體系為甲醇溶液(乙酸/甲醇：v/v15:85)，總體系為50μL；

所述的方法中，DOTA標記的糖鏈與稀土金屬鹽LuCl₃或者HoCl₃的螯合反應中，利用DOTA與稀土金屬離子Ho³⁺/Lu³⁺強的螯合作用，反應溫度是37℃，反應時間是1小時，DOTA與金屬鹽的摩爾比是1:10，反應體系是10mM NH₄AC,pH 5.6；

所述的方法中，將標記上DOTA-Lu和DOTA-Ho的糖鏈混合中，開始的糖鏈衍生DOTA分別進行衍生，衍生DOTA后，其中一份螯合金屬離子Ho³⁺，其中一份螯合金屬離子Lu³⁺，衍生金屬離子后再混合除鹽。

2.按權利要求1所述的基于質譜的N-糖鏈相對定量的方法，其特征在于，所述除鹽，其中包括：預洗：將PGC tip頭在乙腈中反復吹20次進行活化；平衡：將PGC tip頭在超純水中反復吹打20次；上樣：用PGC tip頭反復吹打樣品20次；清洗：將PGC tip頭在超純水中反復吹打20次；洗脫：PGC tip頭在洗脫液(乙腈/水：v/v 3:7，含0.05％TFA)中反復吹打40次。