[發(fā)明專利]一種大黃魚干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3啟動子、核酸構(gòu)建體、細胞及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710457836.8
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107058326B
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒鵬飛;李瑩;姚翠鸞;張晴;孫慶學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 集美大學(xué);廈門大學(xué)嘉庚學(xué)院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 35218 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 姜成康<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發(fā)明公開了一種大黃魚干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3啟動子、核酸構(gòu)建體、載體，細胞及其制備方法和用途。所述大黃魚干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3啟動子的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，或者為與Seq ID No.1互補的核苷酸序列。本發(fā)明還保護了所述的啟動子或核酸構(gòu)建體或載體或重組細胞或含有啟動子或核酸構(gòu)建體或載體或重組細胞的魚類或哺乳動物在調(diào)控目的基因表達或轉(zhuǎn)基因魚中的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種大黃魚干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3啟動子、核酸構(gòu)建體、細胞及其制備方法和用途。

背景技術(shù)

干擾素調(diào)節(jié)因子(Interferon regulatory factor,IRF)家族是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子，具有多種生物學(xué)作用，包括對機體免疫應(yīng)答、細胞凋亡等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)等(Taniquchi T,Oqasawara K,Takaoka A,et al.,IRF family of transcription factorsas regulators of host defense[J].Annu Rev Immunol,2001；19:623–55)。IRF3屬于干擾素調(diào)節(jié)因子家族成員，其蛋白分子二級結(jié)構(gòu)由氨基端的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA bindingdomain,DBD)和羧基端的IRF相關(guān)結(jié)構(gòu)域(IRF associated domain,IAD)構(gòu)成(Lohoff M,Mak TW,Roles of interferon-regulatory factors in T-helper-celldifferentiation[J].Nat Rev Immunol,2005；5:125–35)。哺乳動物中的研究表明，當細胞受病毒侵襲時，細胞可通過模式識別受體如Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)中的TLR3、RIG樣受體(RIG-I-like receptors,RLRs)中的RIG-I/MDA5等識別病毒的RNA結(jié)構(gòu)，并通過其介導(dǎo)的細胞信號通路，誘導(dǎo)IRF3發(fā)生磷酸化并活化，活化的IRF3分子可以自身形成同源二聚體復(fù)合物，或與IRF7形成異源二聚體復(fù)合物，并進入細胞核，結(jié)合到I型干擾素如IFN-β或者其他干擾素調(diào)節(jié)基因如ISG54(interferon stimulated gene 54)基因啟動子區(qū)域，調(diào)節(jié)基因的表達，從而在受病毒感染的宿主細胞以及相鄰細胞中誘導(dǎo)抗病毒狀態(tài)的形成，在宿主的抗病毒免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用(Matsumiya T and Stafforini DM,Function and regulation of retinoic acid-inducible gene-I[J].Crit RevImmunol,2010；30:489–513)。鑒于干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3功能的重要性，研究其基因的表達調(diào)控機制對于揭示宿主的抗病免疫反應(yīng)及細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有重要意義。哺乳動物中的研究中，已有通過構(gòu)建干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3啟動子的熒光素酶報告系統(tǒng)，研究目標基因的功能及其介導(dǎo)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)報道(Sabbah A,Chang TH,Harnack R,et al.,Activation of innate immune antiviral responses by Nod2[J].Nat Immunol,2009；10:1073–80)。

目前，干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3基因已從多種硬骨魚類中得到克隆，如斑馬魚(Daniorerio)、大黃魚(Larimichthys crocea)、鯽魚(Carassius auratus)、鯉魚(Cyprinuscarpio)、草魚(Ctenopharyngodon idella)、大西洋鮭(Salmo salar)、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)、羅非魚(Oreochromis niloticus)、石斑魚(Epinephelus coioides)、歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla)等。一些魚類干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3基因在不同組織中的表達水平以及在病原或病原相關(guān)類似物刺激下的表達調(diào)控已較明確，然而，目前對魚類干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3基因的表達調(diào)控機制，尤其是有關(guān)干擾素調(diào)節(jié)因子IRF3所涉及的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的相關(guān)研究依然較匱乏。

發(fā)明內(nèi)容