[發(fā)明專利]蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710456565.4
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107290469B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈清;崔益瑋;李詩言;戴志遠(yuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工商大學(xué)
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征是包括如下步驟：

1)、蝦夷扇貝樣品前處理：

①、取1g待測蝦夷扇貝肉進(jìn)行勻漿；

②、在漿液中加入10～20mL甲醇后于80±5℃超聲提取20～30min；

③、將超聲提取所得物離心，取出上層清液；

④、以離心所得的沉淀替代步驟②中的漿液重復(fù)上述步驟②～步驟③的超聲提取和離心；

⑤、將所有的上層清液合并后用氮氣吹干，然后用5～10mL水復(fù)溶，得樣品液；

2)、HLB/PDMS涂層攪拌棒的制備：

①、將攪拌棒清洗后烘干；

②、配制PDMS溶膠：

將100±5μL聚二甲基硅氧烷、100±5μL甲基三甲氧基硅烷、10±1μL聚甲基氫硅氧烷和100±5μL 95％三氟乙酸混合，得PDMS溶膠；

95％三氟乙酸為由95％三氟乙酸和5％水混合而得，％為體積％；

③將步驟①所得的烘干攪拌棒浸入步驟②所得的PDMS溶膠，取出后在攪拌棒的表面裹上HLB微粒，然后于60～80℃干燥24～30h，得HLB/PDMS涂層攪拌棒；

3)、攪拌棒吸附萃取：

先將HLB/PDMS涂層攪拌棒在甲醇中浸泡20～30min，然后置入5～10mL的步驟1)所得的樣品液中，加酸調(diào)整pH值為3～7，以600～1000rpm富集60～120min；

然后取出HLB/PDMS涂層攪拌棒放入含有100±20μL乙腈的離心管中超聲10～20min，使樣品中的MCs解吸附，所得到的解吸附溶液用于液相色譜-質(zhì)譜分析；

4)、液相色譜-質(zhì)譜條件：

色譜柱：2.1mm×150mm、3.5μm的Waters XSelect HSS T3，流動相：A為含0.1％甲酸的乙腈溶液，B為含0.1％甲酸的水溶液；

梯度洗脫程序：0～1min，75％B；1～5min，75％～5％B；5～9min，5％B；9～10min，5％～75％B；10～16min，75％B；上述％均為體積％；

柱溫40℃，流速0.30mL/min，進(jìn)樣量10μL；

離子源為電噴霧離子源，正源模式，離子源溫度500℃，電噴霧電壓5.5kV，霧化氣(GS1)壓力45psi，輔助氣(GS2)壓力65psi，氣簾氣(CUR)壓力30psi，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式；7種微囊藻毒素的質(zhì)譜參數(shù)見下表；

7種微囊藻毒素的質(zhì)譜參數(shù)

從而獲得步驟3)所得的解吸附溶液中7種微囊藻毒素的濃度，最終獲得蝦夷扇貝樣品7種微囊藻毒素的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征在于：

所述步驟1)中，重復(fù)上述步驟②～步驟③的超聲提取和離心的次數(shù)為1～3次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征在于：

所述步驟1)中，超聲為20KHz，130W，50％變幅。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征在于：

所述步驟2)的①為將攪拌棒依次浸入水、二氯甲烷、1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl中清洗，再用水沖洗，之后放入80～100℃烘箱烘干2～3h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征在于：

所述步驟2)的③中，重復(fù)上述浸入PDMS溶膠、取出后在攪拌棒的表面裹上HLB微粒，直至攪拌棒表面被HLB微粒完全包覆。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝦夷扇貝中微囊藻毒素檢測方法，其特征在于：

步驟3)使用后的HLB/PDMS涂層攪拌棒超聲清洗5～10min以便重復(fù)利用。