[發(fā)明專利]水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1及其克隆和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710456260.3
• 申請(qǐng)日: 2017-06-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107779455A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱永生;鄭菲艷;許惠濱;蔡秋華;何煒;蔣家煥;連玲;鄭燕梅;張建福;謝華安
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/10;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 長(zhǎng)沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙)43205
• 代理人: 許伯嚴(yán)

1.水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1，其特征在于：其基因組核苷酸序列如SEQ ID NO ：1 所示。

2.權(quán)利要求1所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的cDNA序列全長(zhǎng)如SEQ ID NO ：2所示。

3.用權(quán)利要求2所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1編碼的蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO ：3所示。

4.權(quán)利要求1所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的克隆方法，其特征在于：根據(jù)Osbrca1參考基因序列設(shè)計(jì)引物，分段擴(kuò)增后拼接，并分別以野生型品種云引、日本晴及Mic、突變體品種W14的DNA為模板，進(jìn)行克隆。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的克隆方法，其特征在于：所述擴(kuò)增時(shí)的程序?yàn)椋?5℃ 5min；95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 30s，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 5min，擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為20ul，包含：DNA模板2ul（濃度為50ng/ul），高保真DNA聚合酶KOD 0.4ul，KOD 緩沖液 4ul，引物 F 0.5ul，引物 R 0.5ul，滅菌水12.6ul。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的克隆方法，其特征在于：所述分段擴(kuò)增時(shí)所用引物序列如SEQ ID NO ：4、SEQ ID NO ：5、SEQ ID NO ：6、SEQ ID NO ：7、SEQ ID NO ：8、SEQ ID NO ：9、SEQ ID NO ：10、SEQ ID NO ：11、SEQ ID NO ：12、SEQ ID NO ：13、SEQ ID NO ：14、SEQ ID NO ：15、SEQ ID NO ：16、SEQ ID NO ：17、SEQ ID NO ：18、SEQ ID NO ：19、SEQ ID NO ：20及SEQ ID NO ：21所示。

7.權(quán)利要求2所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的cDNA的克隆方法，其特征在于：根據(jù)Osbrca1的參考基因組序列，去除內(nèi)含子后拼接成cDNA序列，根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物，分別以野生型品種云引和突變體W14的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板進(jìn)行克隆。

8.根據(jù)權(quán)利7要求所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的cDNA的克隆方法，其特征在于：所述擴(kuò)增時(shí)的程序?yàn)椋?5℃ 5min；95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 2min，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 7min，擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為20ul，包含：DNA模板2ul（濃度為50ng/ul），高保真DNA聚合酶KOD 0.4ul，KOD 緩沖液 4ul，引物 F 0.5ul，引物 R 0.5ul，滅菌水12.6ul。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1的cDNA的克隆方法，其特征在于：所述擴(kuò)增時(shí)所用引物序列如SEQ ID NO ：22、SEQ ID NO ：23所示。

10.權(quán)利要求1所述的水稻DNA損傷修復(fù)基因Osbrca1在水稻抗病和抗衰老遺傳育種中的應(yīng)用。