[發(fā)明專利]玄參藥材HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710453807.4
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107328872A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高華宏;蘇薇薇;白楊;彭維
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州番禺容大專利代理事務(wù)所(普通合伙)44326
• 代理人: 劉新年,黃開艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及玄參的HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

背景技術(shù)

現(xiàn)階段的中藥指紋圖譜技術(shù)，具有成分明確、可量化的優(yōu)點，用于鑒別中藥材的真?zhèn)危u價中藥材質(zhì)量的優(yōu)劣及監(jiān)控中藥材質(zhì)量的穩(wěn)定、均一，對全面、準(zhǔn)確、有效地監(jiān)控中藥材質(zhì)量具有重要意義。

玄參是玄參科植物玄參(Scrophularia ningpoensis Hemsl.)的干燥根，具有清熱涼血，滋陰降火，解毒散結(jié)的功效。現(xiàn)有玄參HPLC鑒別方法多采用210nm 作為檢測波長，檢測哈巴苷和哈巴俄苷，本發(fā)明用HPLC法構(gòu)建了玄參的指紋圖譜，采用210和278nm切換檢測哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷和肉桂酸四個主成分，可全面、快速地監(jiān)控玄參的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種玄參藥材HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

該方法包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：精密稱取玄參藥材粉末0.5～5g，超聲1次，每次加50％～70％甲醇水溶液10～100倍量，超聲20～60min，補足重量，濾過，用 0.22μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

(2)對照品溶液的制備：取哈巴苷對照品、哈巴俄苷對照品、肉桂酸對照品適量，加30％甲醇溶解，制成每1ml含哈巴苷60μg、哈巴俄苷23μg、肉桂酸15μg的混合對照品溶液，即得。

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.03％磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫；0～10min，流動相A從3％到10％，流動相B從97％到90％；10～20min，流動相A從10％到33％，流動相B從90％到67％； 20～25min，流動相A從33％到50％，流動相B從67％到50％；25～30min，流動相A從50％到80％，流動相B從50％到20％；流速為1ml/min；檢測波長為前15 分鐘210nm，15分鐘后切換波長為278nm。

(4)對照圖譜的建立：按上述條件對10批以上玄參樣品進行HPLC分析，得到相應(yīng)圖譜，將上述圖譜輸入中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件，匹配主要色譜峰，生成對照圖譜，對照圖譜包括哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷和肉桂酸四個特征峰。

(5)鑒別方法：將供試品圖譜與對照圖譜對比，以肉桂酸為參照峰，包括參照峰在內(nèi)，所得供試品指紋圖譜有4個共有特征峰，相對保留時間分別為0.40、 0.81、0.92、1.00，各特征峰與參照峰(S)的相對保留時間，應(yīng)在規(guī)定值的± 7％范圍之內(nèi)。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明可較全面、準(zhǔn)確快速監(jiān)控玄參藥材的質(zhì)量。該方法具有專屬性強、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好等優(yōu)點，尤其適合規(guī)模化生產(chǎn)的檢測和監(jiān)控。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的玄參標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，圖中的數(shù)字表示各峰的保留時間(tR)；

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例，對本說明做進一步說明。

實施例

一、標(biāo)準(zhǔn)圖譜構(gòu)建

1.儀器：十萬分之一電子分析天平(MS205DU，瑞士Mettler toledo公司)；超純水器(Simplicity，美國密理博Millipore公司)；數(shù)控超聲波清洗器 (KQ250DE，昆山市超聲儀器有限公司)；Ultimate 3000DGLC高效液相色譜儀 (美國Dionex公司，DGP—3600SD雙三元泵、SRD—3600脫氣機、WPS—3000SL 自動進樣器、TCC3000—RS柱溫箱、DAD檢測器、Chromeleon6.8數(shù)據(jù)處理軟件)； Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311B四元泵、G1322A脫氣機、G1316A柱溫箱、 G1329B進樣器、G1315D DAD檢測器)；日本SHIMADZU公司超快速高效液相質(zhì)譜儀(LC—20AD—XR二元泵，SIL—20AD—XR自動進樣器，CTO—20A柱溫箱，SPD —M20A PDA檢測器，日本津島公司)；四級桿—飛行時間質(zhì)譜儀(Triple—TOF5600plus，美國AB SCIEX公司)；色譜柱：Elite Hypersil BDS C18(4.6 ×250mm，5μm，E2521673)、Agilent Zorbax Eclipse Plus C₁₈(4.6×250mm， 5μm，S.N.USUXA04769)、Welch Ultimate XB—C18(4.6×250mm，5μm， S.N.211503514)。