[發明專利]玄參藥材HPLC指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜

在審

• 申請號: 201710453807.4
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107328872A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 高華宏;蘇薇薇;白楊;彭維
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州番禺容大專利代理事務所(普通合伙)44326
• 代理人: 劉新年,黃開艷

1.一種玄參藥材HPLC指紋圖譜構建方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：精密稱取玄參藥材粉末0.5～5g，按料液比10：100，用50％～70％甲醇水溶液超聲提取，用0.22μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取哈巴苷對照品、哈巴俄苷對照品、肉桂酸對照品適量，加30％甲醇溶解，制成每1ml含哈巴苷60μg、哈巴俄苷23μg、肉桂酸15μg的混合對照品溶液，即得；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.03％磷酸溶液為流動相B；梯度洗脫：0min-10min-20min-25min-30min，流動相A:3％-10％-33％-50％-80％；流速1ml/min；檢測波長為前15分鐘210nm，15分鐘后切換波長為278nm；

(4)標準指紋圖譜的建立：按以上方法對10批以上玄參樣品進行HPLC分析，得到相應圖譜，將上述圖譜輸入中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件，匹配主要色譜峰，生成標準指紋圖譜，標準指紋圖譜包括哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷和肉桂酸四個特征峰。

2.一種玄參藥材的指紋圖譜鑒定方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：精密稱取玄參藥材粉末0.5～5g，按料液比10：100，用50％～70％甲醇水溶液超聲提取，用0.22μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取哈巴苷對照品、哈巴俄苷對照品、肉桂酸對照品適量，加30％甲醇溶解，制成每1ml含哈巴苷60μg、哈巴俄苷23μg、肉桂酸15μg的混合對照品溶液，即得；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.03％磷酸溶液為流動相B；梯度洗脫：0min-10min-20min-25min-30min，流動相A:3％-10％-33％-50％-80％；流速1ml/min；檢測波長為前15分鐘210nm，15分鐘后切換波長為278nm；

(4)將供試品圖譜輸入中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件，匹配主要色譜峰，生成供試品指紋圖譜；

(5)鑒別：將供試品指紋圖譜與權利要求1所述的標準指紋圖譜對比，以肉桂酸為參照峰，包括參照峰在內，所得供試品指紋圖譜有4個共有特征峰，相對保留時間分別為0.40、0.81、0.92、1.00，各特征峰與參照峰的相對保留時間，為規定值的±7％范圍之內。