[發(fā)明專利]一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法及模型應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710452157.1
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107439489A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董軍;陳延明;盛敏峰;薛彥平;劉加馳;黃強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C12Q1/68
• 代理公司: 北京商專永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11400
• 代理人: 邢若蘭,高之波

1.一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，其特征在于，方法如下：

選取雌性C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)小鼠與雄性Foxn1nu小鼠雜交得到F1子代均為有毛熒光小鼠，篩選其中♀小鼠，待其性成熟后與親代♂Foxn1nu交配(回交)得F2；產(chǎn)生F2子代性狀分離，篩選其中♀有毛熒光鼠與親代♂Foxn1nu回交，完成一個(gè)回交循環(huán)；此回交循環(huán)過程一共進(jìn)行10代，得到F10，建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，在所述F10子代中篩選♀有毛熒光鼠與♂熒光裸小鼠雜交，篩選其中熒光亮度高的子代，以此建立血緣擴(kuò)大群及生產(chǎn)群。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，其特征在于，篩選其中♀有毛熒光鼠表型的鑒定方法為：孕鼠生產(chǎn)后，利用有無體毛的特征來辨認(rèn)新生仔鼠是否為裸小鼠，無毛為裸小鼠；

性別判斷方法為通過肛門與生殖器的距離辨別；熒光的初步判斷方法為使用熒光成像儀判斷是否為發(fā)綠色熒光的熒光鼠。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，綠色熒光BALB/c裸小鼠需經(jīng)過基因型篩選，待篩選的小鼠出生10d前后剪尾(＜0.5cm)，在56℃熱水浴應(yīng)用蛋白酶K消化6h，基因組DNA抽提試劑盒提取DNA，紫外分光光度計(jì)測OD值，稀釋為100ng/μl作為DNA模板；PCR反應(yīng)體系為20μl，其中PCR mix10μl，上下游引物各1μl，模板DNA1μl，94℃預(yù)變性3min，94℃變性30s，55℃復(fù)性30s，72℃延伸30s，共30個(gè)循環(huán)，末次循環(huán)后72℃延伸7min，1.5％瓊脂糖凝膠電泳，判讀結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，其特征在于，所述上下游引物為EGFP-F和EGFP-R，序列如下：

EGFP-F序列為SEQ No.1：5′-TGCCGTTCTTCTGCTTGTC-3＇，

EGFP-R序列為SEQ No.2：5＇-CCAGGAGCGCACCATCTT-3＇，

目標(biāo)產(chǎn)物長度203bp。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，其特征在于，所述F10需經(jīng)過生化位點(diǎn)檢測，生化位點(diǎn)檢測的檢測位點(diǎn)為Akp1、Car2、Ce2、Es1、Es3、Es10、Gpd1、Gpi1、Hbb、Idh1、Mod1、Pgm1、Pep3和Trf，所述檢測位點(diǎn)即14個(gè)遺傳位點(diǎn)基因表型均為純合則達(dá)到達(dá)到了建立近交系的標(biāo)準(zhǔn)。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法，其特征在于，建立綠色熒光BALB/c裸小鼠所需的近交系熒光裸鼠Pep3位點(diǎn)為b型。

8.使用建立綠色熒光BALB/c裸小鼠模型的方法建立的動(dòng)物模型的應(yīng)用，其特征在于，所述動(dòng)物模型在腦腫瘤移植模型中的應(yīng)用。