[發(fā)明專利]一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710449631.5
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107223566B
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文清;王艷;魯儀增;韓義;劉啟虎;解孝滿;吳丹;咸洋;高廣臣;包志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省林木種質(zhì)資源中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京一格知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11316
• 代理人: 李魏英;趙永偉

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其是一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，包含以下步驟：選用芽莖段作為外植體，進行消毒滅菌操作，植入MS空白培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間是25d，進行啟動培養(yǎng)得到初代苗，從初代苗中選取未玻璃化莖段接種于去玻璃化培養(yǎng)基中，進行去玻璃化培養(yǎng)35d，得到去玻璃化苗，將去玻璃化苗接種于增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)35d，得到繼代苗，對繼代苗進行生根培養(yǎng)獲得生根苗，對生根苗進行煉苗移栽操作，得到健壯的五蓮楊幼苗。本發(fā)明提供的組織培養(yǎng)方法操作簡單，降低了五蓮楊組培過程中玻璃化的發(fā)生率，降低五蓮楊培育成本，推動五蓮楊的商業(yè)化培養(yǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其是一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

五蓮楊(Populus wulianensis)屬于楊柳科(Salicaceae)，楊屬(Populus)白楊派，為難生根樹種。其又名昆崳楊，為山東特有珍稀樹種，主要分布于山東日照(五蓮山)和煙臺(昆崳山、招虎山)等地，生于海拔300～500m山溝雜木林中，散生或形成片林。形態(tài)上介于山楊(Polulus davidiana Dode.)與響葉楊(Polulus adenopuda Maxim.)之間，是良好的用材樹種，具有優(yōu)良的耐水淹能力，對洪災(zāi)和風浪有很強的抵御能力，適應(yīng)風力強勁的生長環(huán)境。

利用組織培養(yǎng)方法繁殖楊屬植物良種資源，不受季節(jié)和生長時間的限制，可以在短時間內(nèi)以較快的速度獲得大量苗木。在常規(guī)的楊屬植物組織培養(yǎng)過程中，尤其白楊派植物的組織培養(yǎng)中，極易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。玻璃化現(xiàn)象是植物組織培養(yǎng)中特有的一種生理失調(diào)或生理病變，表現(xiàn)為試管苗呈半透明狀、失綠、葉片皺縮卷曲、易碎。五蓮楊在初代培養(yǎng)過程中玻璃化發(fā)生率為50％～80％。降低組培過程中的玻璃化發(fā)生率，成為楊屬植物組織培養(yǎng)的重點研究問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，解決五蓮楊組培過程中玻璃化發(fā)生率高、成活率低、無法推廣五蓮楊規(guī)模化育苗的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的，步驟如下：

(1)初代培養(yǎng)：將外植體接種到初代培養(yǎng)基中進行啟動培養(yǎng)，得到初代苗；

(2)去玻璃化培養(yǎng)：將上一步得到的初代苗，接種于去玻璃化培養(yǎng)基中進行去玻璃化培養(yǎng)，得到去玻璃化苗；

(3)增殖培養(yǎng)：將去玻璃化苗接種于增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，得到繼代苗；

(4)生根培養(yǎng)：將繼代苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，得到生根苗；

所述初代培養(yǎng)基為，添加25g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂粉的MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述去玻璃化培養(yǎng)基為，添加0.05mg/LNAA+0.4mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂粉的1/2(N)MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述增殖培養(yǎng)基為，添加0.03mg/LNAA+0.4～0.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述生根培養(yǎng)基為，添加0.05mg/LNAA+15g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8。

作為一種優(yōu)選的實施方案，所述外植體選用1.5～2.0cm的帶莖芽段。

作為一種優(yōu)選的實施方案，所述帶莖芽段是春季3月中旬采集的新抽生頂部帶芽莖段。

作為一種優(yōu)選的實施方案，所述初代培養(yǎng)之前還包括外植體消毒過程，所述外植體消毒過程：用洗衣粉清洗外植體表面，用細流水過夜沖洗外植體，將沖洗干凈的外植體，置于超凈工作臺上進行滅菌，采用75％酒精處理35s，用5％次氯酸鈉處理9min進行消毒處理，消毒后帶莖芽段切成0.8～1.5cm芽莖段，置于初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)。