[發(fā)明專利]一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710449631.5
• 申請(qǐng)日: 2017-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107223566B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文清;王艷;魯儀增;韓義;劉啟虎;解孝滿;吳丹;咸洋;高廣臣;包志剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省林木種質(zhì)資源中心
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京一格知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11316
• 代理人: 李魏英;趙永偉

1.一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，步驟如下：

（1）初代培養(yǎng)：將外植體接種到初代培養(yǎng)基進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)，得到初代苗，所述外植體選用1.5～2.0 cm的帶芽莖段；

（2）去玻璃化培養(yǎng)：將上一步得到的初代苗，接種于去玻璃化培養(yǎng)基中進(jìn)行去玻璃化培養(yǎng)，得到去玻璃化苗；

（3）增殖培養(yǎng)：將去玻璃化苗接種于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，得到繼代苗；

（4）生根培養(yǎng)：將繼代苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到生根苗；

所述初代培養(yǎng)基為，添加 25 g/L蔗糖 + 5.5 g/L瓊脂粉的MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述去玻璃化培養(yǎng)基為，添加0.05 mg/L NAA + 0.4 mg/L 6-BA + 30 g/L蔗糖 + 6.5g/L瓊脂粉的N減半MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述增殖培養(yǎng)基為，添加0.03 mg/L NAA+ 0.4～0.5 mg/L 6-BA + 30 g/L蔗糖 + 6.5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8；

所述生根培養(yǎng)基為，添加0.05 mg/L NAA + 15 g/L蔗糖 + 6.5 g/L瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)PH值至5.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述帶芽莖段是春季3月中旬所采集新抽生的頂部帶芽莖段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種五蓮楊種組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述初代培養(yǎng)之前還包括外植體消毒過(guò)程，所述外植體消毒過(guò)程：用洗衣粉清洗外植體表面，用細(xì)流水過(guò)夜沖洗外植體，將其置于超凈工作臺(tái)上，采用75%酒精處理35 s，用5 %次氯酸鈉處理9 min進(jìn)行脫毒滅菌，脫毒后帶芽莖段切成0.8～1.5 cm芽莖段，置于初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間是25 d。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)所述的一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述初代培養(yǎng)的時(shí)間是25 d，所述去玻璃化培養(yǎng)的時(shí)間是35 d，所述增殖培養(yǎng)的時(shí)間是35 d。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述組織培養(yǎng)方法的培養(yǎng)條件為：白天溫度為25±2 ℃，夜間18±2 ℃，光照時(shí)間為16 h，光照強(qiáng)度為3000～5000 LX。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種五蓮楊種組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述組織培養(yǎng)方法還包括煉苗，所述煉苗：將生根苗移栽于溫室中封口煉苗，5 d后，去除無(wú)菌蓋，繼續(xù)煉苗3～4 d。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種五蓮楊組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述組織培養(yǎng)方法還包括移栽，所述移栽：清水沖洗成活的幼苗，將其移栽至經(jīng)過(guò)0.5 %高錳酸鉀消毒的輕基質(zhì)，所述輕基質(zhì)包括草炭與蛭石，所述輕基質(zhì)中草炭與蛭石的比例是1:1。