[發明專利]干細胞培養基及干細胞分離方法

有效

• 申請號: 201710447388.3
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107083359B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 林詞雄;王旭;林潔璇;李陶;朱剛
• 申請（專利權）人: 沃昕生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 王仲凱

本發明屬于干細胞培養領域，尤其涉及細胞培養基及干細胞培養方法。本發明提供了一種干細胞培養基，包括基礎培養基、血小板裂解物、L?谷氨酰胺和絲裂霉素c。本發明還提供了一種干細胞分離方法，包括以下步驟：所述離體組織與所述干細胞培養基混合置于培養瓶中培養至細胞從所述離體組織中爬出來后刮除離體組織，繼續培養，待培養瓶中干細胞融合度達80％～90％時，消化后傳代培養。本發明所公開的干細胞培養基能避免現有干細胞培養基大多含有動物血清而引入外源病毒的風險，所公開的干細胞分離方法操作簡單。

技術領域

本發明屬于干細胞培養領域，尤其涉及干細胞培養基及干細胞培養方法。

背景技術

干細胞(StemCell)是一種具有自我更新能力以及多向分化潛能的細胞。按照分化潛能，干細胞可分為三大類：全能干細胞、多能干細胞、單能干細胞。按照發育階段，干細胞又可以分為：胚胎干細胞與成體干細胞。由于倫理學的限制，現在用于臨床研究和應用的干細胞多為成體干細胞。成體干細胞來源于成年動物的許多組織和器官，包括造血干細胞、神經干細胞、脂肪干細胞、骨髓間充質干細胞、臍帶干細胞、臍血干細胞等等。

脂肪干細胞即脂肪來源干細胞或脂肪來源間充質干細胞 (adipose-derivedstem cells，ADSCs)，由于脂肪干細胞具有促進傷口愈合、損傷組織細胞再生和減少疤痕的能力及抗衰老能力，脂肪干細胞一經發現，就在以修復重建為主旨的整形外科及以年輕化為核心的美容醫學領域引起轟動。隨著國內消費水平的不斷提高，新一代的微整形、抗衰老為主流的美容市場獲得了突破性的機遇。其中脂肪干細胞產品以其獨特的優勢尤為引人注目。

脂肪干細胞具有來源豐富，取材方便的特點。一方面，脂肪組織在體內分布廣泛，儲量豐富；另一方面，吸脂術是整形外科成熟的常規手術，手術風險小，其作為常規“廢棄的副產品”獲取容易。對患者來說，吸脂雕塑體形的同時享受干細胞的年輕化神奇功效是一次雙贏的生命重塑，痛苦與恐懼感少于骨髓提取，亦無血源污染與免疫排斥風險，由此形成臨床應用的優勢。

目前，脂肪干細胞的分離方法多為膠原酶消化法，導致細胞得率低，消化時間不好把握，容易影響細胞的活性。而且培養體系多采用含血清培養法，由于血清含有其它動物源成分，使培養體系存在引入外源性病毒的風險，從而使脂肪干細胞在臨床應用中存在很大瓶頸。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種干細胞培養基及干細胞分離方法，能避免現有干細胞培養基大多含有血清而引入外源病毒的風險，而且公開的干細胞分離方法無需膠原酶消化法分離，能提高干細胞分離效率。

本發明提供了一種干細胞培養基，包括基礎培養基、血小板裂解物、L- 谷氨酰胺和絲裂霉素c。

作為優選，所述血小板裂解物在所述干細胞培養基的體積百分比為5％。

作為優選，所述L-谷氨酰胺在所述干細胞培養基的濃度為4mmol/L。

作為優選，所述絲裂霉素c在所述干細胞培養基的濃度為50ng/ml。

本發明還提供了一種干細胞分離方法，包括以下步驟：

獲取離體組織，所述離體組織與干細胞培養基混合置于培養瓶中培養至所述離體組織中的細胞從所述組織中爬出來后刮除所述離體組織；繼續培養，待培養基中細胞融合度達80％～90％時，消化后傳代培養。

作為優選，所述離體組織在所述干細胞培養基培養的第9天刮除離體組織。

其中，所述分離方法中的干細胞培養基為本發明提供的干細胞培養基。

其中，所述離體組織與干細胞培養基混合置于培養瓶中培養至所述離體組織中的細胞從所述組織中爬出來時，這時所述離體組織與干細胞培養基混合培養的時間為第9天。