[發明專利]一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法

有效

• 申請號: 201710446674.8
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107328944B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 王琴;李成明;王婷楠
• 申請（專利權）人: 王琴
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟一：稀釋

配制1×PBS溶液，抗原和血清開啟后，按每瓶標簽上所示的產品規格用1ml或2ml PBS溶液充分溶解，備用；

所述1×PBS溶液為NaCl 8g，NaH₂PO₄·2H₂O 1.561g，Na₂HPO₄·12H₂O 3.582g，加水至1000ml，調ph值至7.2；

步驟二：進行血凝試驗

(1)在V型微量反應板中，每孔加0.025ml PBS溶液；

(2)在第1孔中加入0.025ml抗原，依次作0.025ml的對倍稀釋至第11孔；

(3)每孔加入0.025ml PBS溶液；

(4)每孔加入0.025ml 1％(V/V)雞紅細胞懸液；

(5)將反應板在振蕩器上震蕩1-2分鐘或輕叩反應板混合反應物，20-25℃靜置40分鐘，或者是2-8℃靜置60分鐘，當對照孔的紅血細胞呈顯著鈕扣狀時判定結果；

(6)結果判定：將反應板傾斜，觀察紅細胞有無呈淚滴樣流淌，完全無淚滴樣流淌即100％凝集的最高稀釋倍數為血凝效價；

步驟三：進行血凝抑制試驗篩選

(1)根據步驟二(6)中血凝試驗測定的血凝效價，計算配制4單位抗原；

(2)選擇一塊稀釋板，即：1:8U型稀釋板，記為A板；選擇三塊反應板，即：1:8V型空反應板，記為B板；第一塊V型反應板，記為C板；第2塊V型反應板，記為D板；A板、B板、C板和D板均為96孔,孔的排布均為8行×12列；

(3)A板中每孔加入0.070ml PBS溶液，抗原對照孔加入0.025ml PBS溶液；

(4)C板和D板中全板每孔加入0.025ml PBS溶液；

(5)A板中每孔加入0.010ml被檢血清樣品，血清樣品分別用S1、S11、S21……S71；S2、S12、S22……S72；S3、S13、S23……S73；……；S9、S19、S29……S79；S10、S20、S30……S80來表示，被檢血清樣品加入順序按S1、S2、S3……S10；S11、S12、S13……S20；……；S71、S72、S73……S80依次加入并混勻；換槍尖，全板加80份樣品，并做陽性、陰性、紅細胞、抗原對照；

a.用8孔移液器從A板中按S1、S11、S21、S31、S41、S51、S61、S71順序取0.025ml樣品混合液依次移入未加PBS溶液的B板的S1、S11、S21、S31、S41、S51、S61、S71孔中，剩余每列孔按此方法作相同的處理，此時B板濃度呈1:8；

b.分別用8孔移液器從B板中按S1、S11、S21、S31、S41、S51、S61、S71順序取0.025ml樣品混合液依次移入已加0.025ml PBS溶液的C板的S1、S11、S21、S31、S41、S51、S61、S71孔中，按此方法作相同的處理，將B板中第2列、第3列、第4列、第5列、第6列、第7列、第8列、第9列、第10列孔分別對應于C板剩余的第3列、第5列、第7列、第9列以及D板第1列、第3列、第5列、第7列、第9列孔，然后對C板和D板的第2列、第4列、第6列、第8列、第10列分別對應C板和D板的第1列、第3列、第5列、第7列、第9列做倍比稀釋，吹打18-20次混勻，棄去0.025ml；此時C板和D板濃度均變為1:16和1:32；

(6)分別在B板、C板和D板上每孔加0.025ml的4單位抗原，20-25℃靜置40分鐘，或者是2-8℃靜置60分鐘；

(7)分別在B板、C板和D板上每孔加入0.025ml 1％(V/V)的雞紅細胞懸液，輕晃混勻后，20-25℃靜置40分鐘，或者是2-8℃靜置60分鐘，當對照孔紅細胞呈顯著鈕扣狀時判定結果；

(8)篩選出陽性被檢血清樣品,并用篩選出的陽性被檢血清樣品重新進行血凝抑制試驗操作，判定免疫抗體水平。

2.如權利要求1所述血凝和血凝抑制試驗篩選方法，其特征在于，步驟三中，所述被檢血清樣品的血凝抑制效價＜1:8判為陰性血清；血凝抑制效價＝1:8判為可疑血清，血凝抑制效價≥1:16判為陽性血清。

3.如權利要求2所述血凝和血凝抑制試驗篩選方法，其特征在于，所述可疑血清的樣品應重檢1次，重檢血凝抑制效價≥1:8判為陽性血清，血凝抑制效價<1:8判為陰性血清。