[發(fā)明專利]一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710446674.8
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107328944B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 王琴;李成明;王婷楠
• 申請（專利權）人: 王琴
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法，包括以下步驟：抗原和血清的稀釋；血凝試驗；血凝抑制試驗篩選，血凝抑制試驗篩選中通過采用1塊稀釋板和3塊反應板，一次性檢測80份血清樣品，篩選出陽性樣品最終判定免疫抗體水平，相較傳統(tǒng)方法可節(jié)省抗原一半多。本發(fā)明用較少的抗原檢測較多的樣品，達到檢測抗體水平高低的目的，檢測方法簡單，檢測結果準確可靠，檢測效率高，大大減少了工作量，降低了對實驗人員的需求量，很好的解決基層實驗室檢測經費緊張，檢測試劑有限，檢測數量大的問題，本發(fā)明篩選方法尤其適用于基層農村動物防疫檢疫機構，既節(jié)約了檢測試劑，又加快了檢測速度。

技術領域

本發(fā)明屬于生物免疫學技術領域，尤其涉及一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法。

背景技術

在獸醫(yī)免疫學實驗中，血凝試驗(HA)主要用來測定抗原的血凝價以及是否存在血凝性抗原，而血凝抑制試驗(HI)則作為一種抗體監(jiān)測技術，廣泛應用于獸醫(yī)實驗室監(jiān)測、獸醫(yī)門診、大中型養(yǎng)禽場。實驗室檢驗作為基層動物防疫檢疫機構的必要技術手段，滿足了動物防疫檢疫工作的需求。在實際應用中，HA和HI試驗可用于病毒分離、鑒定、分型，檢測抗原抗體、免疫鑒定等等，例如：養(yǎng)禽場常常將禽流感、新城疫、減蛋綜合癥等疫苗免疫后的抗體水平，作為衡量免疫程序是否合理的依據。目前，常用的HI篩選方法盡管操作簡便、快速、準確，但是檢測多份樣品需要進行多次試驗，使用較多的抗原，試驗繁雜，工作量大，對于基層獸醫(yī)實驗室而言，要充分發(fā)揮動物疫病預防檢測的作用，日常檢測與臨時檢測相結合，病原學檢測和抗體檢測相結合，及時準確掌握動物疫情的動態(tài)分析規(guī)律掌握免疫抗體檢測水平，分析查找原因，總結經驗規(guī)律做到對動物疫病的防控有前瞻性，對發(fā)生的動物疫病及時發(fā)現果斷處置等，這種高要求、嚴標準的工作性質使得基層獸醫(yī)實驗室在進行血凝抑制試驗過程中出現實驗室人員不足、工作量過大的問題，同時實驗經費有限，資源配置低，檢測試劑有限，難以及時高效的完成動物防疫檢疫工作。為了解決這一問題，通過實踐總結，發(fā)明人摸索出一種血凝和血凝抑制實驗篩選方法，可以用較少的抗原檢測較多的樣品，達到檢測抗體水平高低的目的，檢測方法簡單，檢測結果準確可靠，檢測效率高，大大減少了工作量，降低了對實驗人員的需求量。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法，旨在解決基層獸醫(yī)實驗室在進行血凝抑制試驗時，所需抗原用量大，需要較多的實驗人員進行試驗操作，工作量過大，費時費力的問題。

本發(fā)明是這樣實現的，一種血凝和血凝抑制試驗篩選方法，包括以下步驟：

步驟一：稀釋

配制1×PBS溶液，抗原和血清開啟后，按每瓶標簽上所示的產品規(guī)格用1ml或2mlPBS溶液充分溶解，備用；

所述1×PBS溶液為NaCl 8g，NaH₂PO₄·2H₂O 1.561g，Na₂HPO₄·12H₂O 3.582g，加水至1000ml，調ph值至7.2；

步驟二：進行血凝試驗

(1)在V型微量反應板中，每孔加0.025ml PBS溶液；

(2)在第1孔中加入0.025ml抗原，依次作0.025ml的對倍稀釋至第11孔；

(3)每孔加入0.025ml PBS溶液；

(4)每孔加入0.025ml 1％(V/V)雞紅細胞懸液；

(5)將反應板在振蕩器上震蕩1-2分鐘或輕叩反應板混合反應物，20-25℃靜置40分鐘，或者是2-8℃靜置60分鐘，當對照孔的紅血細胞呈顯著鈕扣狀時判定結果；

(6)結果判定：將反應板傾斜，觀察紅細胞有無呈淚滴樣流淌，完全無淚滴樣流淌(100％凝集)的最高稀釋倍數為血凝效價；