[發明專利]果蔬中六種食源性致病菌多重LAMP檢測引物、檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201710446459.8
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107022644B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王文博;劉賓;苑學霞;李瑞菊
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/445;C12R1/42;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種果蔬中單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）、阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）、志賀氏菌（Shigella sp.）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella sp.）和大腸埃希氏菌(Escherichia.coli) O157:H7六種食源性致病菌多重LAMP檢測試劑盒，包括若干個裝有反應液的LAMP反應管，其特征在于：每個反應管的反應液中含有果蔬中單增李斯特菌、阪崎腸桿菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸埃希氏菌O157:H7六種食源性致病菌多重LAMP檢測引物，分別由一對外引物和一對內引物組成，所述外引物和內引物的核苷酸序列分別為：

單增李斯特菌的檢測引物組的序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.4所示：

SEQ ID No.1 F3：ACATATGCTTAATCCACGTTAT；

SEQ ID No.2 B3：TTCGCATTATCTTTATGTTGTTG；

SEQ ID No.3 FIP：TACTGCAAGTGATGCTGCGTTTTTGATACCTTTGTCATTGGTTC；

SEQ ID No.4 BIP：TCCACTCTTCATTTATGGAGGAGTAACATAGTGGCCAACTGC；

阪崎腸桿菌的檢測引物組的序列如SEQ ID No.5～SEQ ID No.8所示：

SEQ ID No.5 F3：GGCGCTTACCACTTTGTGAT；

SEQ ID No.6 B3：GCCTCTAGACGAAAGGGACT；

SEQ ID No.7 FIP：GAGGTGATCCAACCGCAGGTCATGACTGGGGTGAAGTCG；

SEQ ID No.8 BIP：CCTGCAAGATACAACCTCGCGTCGCAGACAACCCTGCTTC；

志賀氏菌檢測引物組的序列如SEQ ID No.9～SEQ ID No.12所示：

SEQ ID No.9 F3：ACGGTCTGATTGAACTGTT；

SEQ ID No.10 B3：TGCGATCTGGTTCAACAA；

SEQ ID No.11 FIP：AGCGAGCAGTGTTTTAACCAGTTCAAATTGTCCACCGTCT；

SEQ ID No.12 BIP：GCACTTTTATTCCGGATTGCGGGCAGATGGTACACAACCTC；

金黃色葡萄球菌檢測引物組的序列如SEQ ID No.13～SEQ ID No.16所示：

SEQ ID No.13 F3：TTGGTAGAGAGCAATTCAATG；

SEQ ID No.14 B3：TCTAAAACATGATGACCAATGG；

SEQ ID No.15 FIP：CACAGCTAAACTCGCTGCATGATTTGACACTTTTGTAATCGGA；

SEQ ID No.16 BIP：ACCAGCCAAAGCGTACAATCTGGGTTTTTCCTAAACCAACA；

沙門氏菌檢測引物組的序列如SEQ ID No.17～SEQ ID No.20所示：

SEQ ID No.17 F3：CCACCATCACCATTACCACA；

SEQ ID No.18 B3：CTGCCCTTGCCTGGAATT；

SEQ ID No.19 FIP：GGTCGAAAAAAAAGCCCGCACTGCTGACGCGTACAGGAAAC；

SEQ ID No.20 BIP：CATGCGAGTGTTGAAGTTCGGCGGCAACACGCAGAAAACG；

大腸埃希氏菌O157:H7檢測引物組的序列如SEQ ID No.21～SEQ ID No.24所示：

SEQ ID No.21 F3：AACTACTGTAAGTAATGGAACG；

SEQ ID No.22 B3：GTGATTTTTTGTTCTATGTCACT；

SEQ ID No.23 FIP：TGTTGGAACAATAACTTCATCTCCTGTTGCTCTTCATTTAGCTTTG；

SEQ ID No.24 BIP：AATGCTATAAAATACACAGGAGCCACAGACATTTGCCAAGTTTCA；

所述試劑盒還包括：緩沖液Thermoplol buffer、氯化鎂溶液(MgCl₂)、甜菜堿Betaine、鏈置換脫氧核糖核酸聚合酶Bst DNA聚合酶、UNG酶、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、待檢測樣品的DNA 模板以及雙蒸水。