[發明專利]一種細胞周期阻滯劑6BAR在人乳腺癌細胞中的應用

在審

• 申請號: 201710445304.2
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107326010A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 王黎;程嬌;崔昌浩;林凡琳;張瀚文;于冬麗;鄧營營
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 大連理工大學專利中心21200
• 代理人: 溫福雪,侯明遠

技術領域

本發明涉及細胞分裂素N6-benzyladenosine(6BAR)作為一種細胞周期阻滯劑對人乳腺癌細胞株抗腫瘤作用，屬于生物化學與分子生物學技術領域。

背景技術

乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，據世界衛生組織國際癌癥研究中心(International Agency for Research on Cancer,IARC)統計，2015年全球女性乳腺癌新發病例達155萬左右，占全部女性惡性腫瘤發病的25％左右；因乳腺癌死亡占所有女性惡性腫瘤死亡的15％左右，占所有女性死亡的2％。與其他大多數國家一樣，乳腺癌已成為了中國女性最常見的癌癥，在上海等東部沿海城市，乳腺癌已超越肺癌成為女性發病率最高的癌癥；目前每年中國乳腺癌新發數量和死亡數量分別占全世界的12.2％和9.6％。臨床上用于治療乳腺癌的常規藥物雖然對治療起到重要作用，但卻存在著明顯的毒副作用。經大量實踐證明，運用現代技術，從天然產物中獲得的天然活性物質的活性成分能治療乳腺癌，同時減輕放化療的毒副作用。因此，尋找有效提高治療效率，毒副作用小的天然藥物來治療乳腺癌是十分必要的。

細胞分裂素CK(cytokinin)是二十世紀五十年代年被發現的一類植物激素，它在植物的生長發育中起決定性作用，天然存在的細胞分裂素是腺嘌呤的衍生物，是其嘌呤N6位置上的H被其它基團取代形成的。常見的天然存在的細胞分裂素有：玉米素(Zeatin,ZT)、玉米素核苷(Zeatin riboside,ZR)、二氫玉米素(dihydrozeatin,dHZT)、異戊烯基腺苷(isopentenyl adenosine,i6A)。目前越來越多的研究發現，CK不僅調節植物的生長發育同時對動物細胞的增值和分化也起到很重要的影響。

N6-benzyladenosine(6BAR)是存在于植物中的細胞分裂素(CK)的一種核苷形式，俗名為6-芐基腺苷，分子式為C₁₇H₁₉N₅O₄,分子量為357.36。核苷類似物是一類重要的抗癌化療劑，包括各種嘌呤和嘧啶核苷的衍生物，核苷類似物家族主要是一類抗代謝物，通過干擾腫瘤細胞的DNA合成和DNA合成中需要的嘌呤、嘧啶、嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的合成抑制了腫瘤細胞的存活和復制必不可少的代謝途徑，以及以細胞內的酶、核酸為作用靶而產生細胞毒性。近年來，隨著核苷轉移子、核苷代謝過程中的酶以及核苷的抗癌機制的不斷深人的研究，核苷類抗癌化療利取得了很大進展.從而猜測6BAR也可以干擾或者直接作用于蛋白質、核酸的生物合成，而干擾腫瘤細胞和病毒復制，在抗腫瘤和抗病毒方面發揮著重要的作用。當用6BAR處理人乳腺癌細胞株后導致細胞周期不同程度的受阻和(或者)凋亡。

發明內容

本發明針對上述現有技術，本發明提供了6BAR在人乳腺癌細胞株中抗腫瘤的應用。

本發明的技術方案：

一種細胞周期阻滯劑6BAR在人乳腺癌細胞株中的應用，步驟如下：

(1)細胞復蘇：將裝有凍存人乳腺癌細胞株MCF7的凍存管從-80℃冰箱中取出，迅速放入37℃水浴鍋中，輕微搖動，待液體融化；將凍存管中的人肺癌細胞株A549懸浮于含有10％滅活胎牛血清的無菌RPMI 1640培養液的離心管中，1000rpm，5min離心，離心結束后，棄上清，輕輕彈起細胞，再次入無菌RPMI 1640培養液與離心管中，把細胞懸浮起來，轉移到培養瓶中左右輕輕搖動，使培養瓶中的細胞均勻分布，得到復蘇的人乳腺癌細胞株MCF7；

(2)細胞培養：將復蘇的人乳腺癌細胞株MCF7置于濃度為5％CO₂、相對濕度為90％、溫度為37℃的培養箱中培養，10h后觀察細胞，若已貼壁，將培養液全部吸出，再次加入等量的RPMI 1640培養液；待細胞長至培養瓶底面積的70％～80％傳代1次；

(3)藥物配制：6BAR先用0.1％DMSO溶解，繼續用無菌RPMI 1640培養基將用0.1％DMSO溶解好的6BAR稀釋，使6BAR溶液的母液濃度達到1mM，繼續用無菌RPMI 1640培養基將溶解好的6BAR溶液的母液稀釋至濃度為1μM-500μM，過濾除菌，室溫保存；