[發(fā)明專利]Taqman-MGB探針檢測綿羊BMPR-IB基因A746G突變的試劑盒和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710444692.2
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107338287B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊華;楊永林;李良遠(yuǎn);盧守亮;楊涵羽璐
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)墾科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及Taqman?MGB探針檢測綿羊BMPR?IB基因A746G突變的試劑盒和方法。公開的試劑盒，主要包括3管陽性對照樣品、DNA提取液Ⅰ、DNA提取液Ⅱ、2×LightCycler 480 probes master反應(yīng)緩沖液、引物BMF和BMR、探針BPA和BPG、ddH₂O。公開檢測的方法，包括基因組DNA快速提取，利用引物對基因組DNA進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增，基因型判讀。該試劑盒及檢測方法操作簡單、檢測速度快、準(zhǔn)確性高，而且不需要進(jìn)行PCR產(chǎn)物后續(xù)分析即可判型，反應(yīng)全過程在封閉的管內(nèi)進(jìn)行，減少了交叉污染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及Taqman-MGB探針檢測綿羊BMPR-IB基因A746G突變試劑盒和方法。

背景技術(shù)

高繁殖力是世界綿羊生產(chǎn)共同追求的重要目標(biāo)之一。但由于綿羊絕大多數(shù)產(chǎn)單羔，少數(shù)產(chǎn)雙羔，故極大地影響了綿羊的繁殖性能，隨著集約化養(yǎng)羊業(yè)的不斷發(fā)展，如何提高綿羊繁殖力是養(yǎng)羊業(yè)獲得較好經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵。多胎性狀是綿羊重要的繁殖性狀之一，也是綿羊多產(chǎn)、高產(chǎn)的基礎(chǔ)，繁殖力的高低直接影響生產(chǎn)成本，進(jìn)而影響經(jīng)濟(jì)效益，因此，綿羊的多胎性能引起人們的普遍關(guān)注，國內(nèi)外紛紛引進(jìn)或培育多胎綿羊品種。研究表明，大部分綿羊品種產(chǎn)羔數(shù)低，多羔的遺傳力較低，僅為0.12，在一定程度上限制了我國綿羊生產(chǎn)性能的提高，同時，繁殖性狀與生長速度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，因而影響了常規(guī)育種方法的效果和可操作性，選育周期長。分子標(biāo)記輔助選擇可以彌補(bǔ)常規(guī)表型選擇方法的不足，提高選擇的準(zhǔn)確性并縮短世代間隔，提高育種效率。

自從1980年以來，研究人員開始篩選、鑒定控制綿羊排卵率和產(chǎn)羔率的主效基因，研究證實(shí)綿羊FecB基因?qū)嶋H為骨形態(tài)發(fā)生蛋白IB型受體（BMPR-IB）基因，BMPR-IB基因的突變能夠顯著增加綿羊排卵率，是中國美利奴羊、小尾寒羊、湖羊等綿羊排卵率和產(chǎn)羔數(shù)的主效基因。我們前期研究表明，中國美利奴羊（軍墾型）BMPR-IB基因存在A746G堿基突變，該基因編碼區(qū)746處的A→G突變的發(fā)生與FecB表型一致，在綿羊群體中存在3種基因型，其遺傳效應(yīng)表現(xiàn)為：BB純合型與地方品種羊相比，平均排卵數(shù)增加3枚，每只母羊平均每胎能多產(chǎn)1.5只羔羊；B+雜合型與地方品種羊相比，平均排卵數(shù)增加1.5枚，每只母羊平均每胎能多產(chǎn)1.0只羔羊；++野生型產(chǎn)羔數(shù)與地方品種接近。BMPR-IB基因B等位基因在綿羊群體中存在，使得羊群的繁殖率比較高，該基因A746G堿基突變對綿羊排卵率呈加性效應(yīng)，對窩產(chǎn)羔數(shù)呈部分顯性效應(yīng)。因此，BMPR-IB基因可用于多胎綿羊的分子育種。

通過對母羊BMPR-IB基因A746G堿基突變的檢測，開展BMPR-IB基因標(biāo)記輔助選擇，組建BB基因型綿羊群體，是快速提高綿羊繁殖力的一個有效方法，能夠使群體平均產(chǎn)羔數(shù)達(dá)到230%以上，極大的增加羔羊數(shù)量，提高養(yǎng)羊的經(jīng)濟(jì)效益。而建立BMPR-IB基因A746G堿基突變的檢測方法是實(shí)現(xiàn)分子標(biāo)記輔助選擇的前提條件。目前，針對BMPR-IB基因A746G突變的檢測方法主要有：測序法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)（PCR-RFLP）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）、基因芯片法、熒光定量PCR方法（qPCR）。