[發明專利]用于BRAFV600E基因突變的試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 201710443065.7 | 申請日： | 2017-06-13 |
| 公開（公告）號： | CN107177682A | 公開（公告）日： | 2017-09-19 |
| 發明（設計）人： | 韋玉軍;李航;王娟;蘇軍;吳遠航 | 申請（專利權）人： | 安徽安龍基因醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市廬陽*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 brafv600e 基因突變 試劑盒 檢測 方法 | ||
1.用于BRAF V600E基因突變的試劑盒，其特征在于：包括BRAF V600E基因突變檢測的特異引物和探針，其特異引物與探針包括如下序列：
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括引物探針混合液，引物探針混合液包含突變位點基因和內控引物探針、質控基因和內控檢測引物探針；突變和質控探針5’端標記FAM熒光素，3’端標記MGB熒光素；內控5’端標記HEX熒光素，3’端標記BHQ1熒光素。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒還包括BRAF V600E突變及BRAF野生型PCR反應液、酶系1、陽性對照、陰性對照和DEPC水。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：還應包括可用于血清游離DNA樣本、組織樣本或穿刺樣本的BRAF V600E基因突變的檢測。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：還應包括如下擴增體系：
6.一種BRAF V600E基因突變的檢測方法，所述的方法包含以下步驟：
(1)樣本DNA的提取
血清游離DNA提取：推薦使用Sigma公司的GenEluteTMPlasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit。
組織樣本DNA提取：推薦使用QIAgene公司的QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(貨號：56404)
(2)PCR反應體系的配制
在試劑配制室按照試劑盒說明書要求進行配制，PCR反應液16ul，酶系1
2ul、引物探針混合液2ul，模板DNA5ul，陰性對照和質控視為樣本，作相同處理。
(3)結果判讀：
根據熒光PCR擴增儀顯示的Ct值判斷檢測結果：利用特異性引物和熒光探針進行PCR檢測，突變和質控由FAM指示，內控由HEX信號指示，通過計算ΔCt的大小進行判斷，反應管的ΔCt值＜ΔCt Cut-off值時，則樣品為該反應管對應信號突變陽性，反之則為陰性或低于試劑盒的檢測下限。
表CutoffΔCt值
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