[發(fā)明專利]多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠的體外梯度降解方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710442286.2
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107179381B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 簡軍;李睿智
• 申請（專利權(quán)）人: 愛美客技術(shù)發(fā)展股份有限公司
• 主分類號: G01N31/00
• 分類號: G01N31/00;G01N1/28;C12Q1/34
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 趙尊生

本發(fā)明涉一種多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的體外梯度降解方法。采用自由基對多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠進(jìn)行降解，并采用凱氏定氮儀對降解產(chǎn)物進(jìn)行定量;或采用溶菌酶對多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠進(jìn)行降解，并采用GB/T 5009.7?2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中還原糖的測定》中第三法鐵氰化鉀還原糖測定法對降解產(chǎn)物進(jìn)行定量。該方法模擬體內(nèi)酶環(huán)境或自由基環(huán)境，通過酶或自由基對多重交聯(lián)殼聚糖凝膠進(jìn)行定量降解，通過確定降解產(chǎn)物中還原糖的含量或降解產(chǎn)物中的氮含量的測定，確定殼聚糖凝膠的降解程度，從而獲得多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的降解曲線，確定殼聚糖凝膠的降解周期。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠的體外梯度降解方法。該方法模擬體內(nèi)酶環(huán)境或自由基環(huán)境，通過酶或自由基對多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠進(jìn)行定量降解，通過確定降解產(chǎn)物中還原糖的含量或降解產(chǎn)物中的氮含量的測定，確定凝膠的降解程度，從而獲得多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠的降解曲線，確定凝膠的降解周期。

背景技術(shù)

殼聚糖（又稱葡糖胺聚糖，英文名及簡稱：chitosan，CS）是甲殼素經(jīng)過脫乙酰處理后得到的產(chǎn)物，所以又被稱為：“脫乙酰甲殼素”。殼聚糖是由N-乙酰-D-氨基葡萄糖單體通過β-l,4-糖苷鍵連接起來的直鏈狀高分子化合物，難溶于水，卻易溶于酸。殼聚糖具有良好的生物相容性和生物可降解性，無毒，物理和化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，粘合性好，成纖維及成膜性能優(yōu)良，是一種可被生物體降解吸收的天然高分子材料。殼聚糖具有非常高的醫(yī)用價(jià)值：殼聚糖可降低體內(nèi)的膽固醇；還具有良好的抑菌效果，能夠不利于細(xì)菌生長的環(huán)境；殼聚糖可以吸附和排泄體內(nèi)重金屬；還有能預(yù)防高血壓，提高人體免疫力等功效。研究表明溶菌酶（一種人體體液中含量較高的抗菌物質(zhì)，淚液中的含量最多，大約占人體淚液蛋白含量的40%），可以催化水解殼聚糖的β-1,4-氨基葡萄糖苷鍵成為氨基葡萄糖，因此殼聚糖在體內(nèi)可被降解吸收。此外，體內(nèi)的多種活性物質(zhì)，如活性氧簇自由基以及甲殼素酶、葡萄糖酶、蛋白酶、脂酶、纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶等30多種酶制劑也促進(jìn)殼聚糖的降解代謝。酶對多糖的水解具有高度的選擇性，而無其它副反應(yīng)。因此，殼聚糖作為一種非常安全的天然高分子多糖，已經(jīng)廣泛的應(yīng)用在生物醫(yī)藥，組織工程等領(lǐng)域。

作為可在生物醫(yī)藥及組織工程領(lǐng)域使用的材料，研究殼聚糖的降解過程十分必要。當(dāng)前，針對殼聚糖的降解過程以及降解試劑已經(jīng)有很多報(bào)道。目前已知的殼聚糖在體內(nèi)可被溶菌酶(Lysozyme)或自由基降解（鄧倩瑩等，化學(xué)世界，2005，6，338-340），溶菌酶可進(jìn)攻殼聚糖中乙酰氨基葡萄糖，使1,4-糖苷鍵發(fā)生斷裂而降解；自由基可直接促使糖苷鍵發(fā)生斷裂而降解。交聯(lián)殼聚糖雖然以殼聚糖作為主體，但針對交聯(lián)殼聚糖的降解研究卻鮮有報(bào)道。因此，尋找一種適合于交聯(lián)殼聚糖的降解方法，確定交聯(lián)殼聚糖的降解趨勢也十分必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的體外梯度降解方法。該方法模擬體內(nèi)酶環(huán)境或自由基環(huán)境，通過酶或自由基對多重交聯(lián)殼聚糖凝膠進(jìn)行定量降解，通過確定降解產(chǎn)物中還原糖的含量或降解產(chǎn)物中的氮含量的測定，確定殼聚糖凝膠的降解程度，從而獲得多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的降解曲線，確定殼聚糖凝膠的降解周期。

本發(fā)明提供的多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的體外梯度降解方法為采用自由基對多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠進(jìn)行降解，并采用凱氏定氮儀對降解產(chǎn)物進(jìn)行定量;或采用溶菌酶對多重交聯(lián)殼聚糖或其衍生物凝膠進(jìn)行降解，并采用GB/T 5009.7-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中還原糖的測定》中第三法鐵氰化鉀還原糖測定法對降解產(chǎn)物進(jìn)行定量。

本發(fā)明提供的多重交聯(lián)殼聚糖凝膠的體外梯度降解方法包括的步驟:

1）配置濃度為0.001~0.1 mol/L，優(yōu)選0.01~0.05 mol/L的抗壞血酸溶液，并用1~6mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至3~3.5；