[發明專利]多重交聯殼聚糖或其衍生物凝膠的體外梯度降解方法

有效

• 申請號: 201710442286.2
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107179381B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 簡軍;李睿智
• 申請（專利權）人: 愛美客技術發展股份有限公司
• 主分類號: G01N31/00
• 分類號: G01N31/00;G01N1/28;C12Q1/34
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 趙尊生

1.一種多重交聯殼體或其衍生物凝膠的體外梯度降解方法，其特征在于包括以下步驟:

1）配置濃度為0.001~0.1 mol/L的抗壞血酸溶液，并用1~6 mol/L鹽酸調節pH至3~3.5；

2）取交聯殼聚糖或其衍生物凝膠1~10 mL,質量濃度范圍為10~500mg/mL,置于10~50mL離心管，加入步驟1）中的抗壞血酸溶液1~10 mL，并冷卻至0~5℃；

2）保持0~5℃的環境，加入雙氧水溶液1~10 mL，其中雙氧水濃度與加入體積與抗壞血酸的濃度與體積相等，雙氧水的濃度為0.001~0.1 mol/L；

3）將體系置于恒溫水浴振蕩器中，震蕩溫度設定37℃，每隔10~20 min進行取樣，每次取出降解液100~500 μL，同時補充步驟1）中抗壞血酸溶液100~500 μL，總降解時間為120~1440min；

4）將取出后的降解液用濃度為1mol/L氫氧化鈉中和至pH=7.0后，密封在截留分子量10~14 KDa的透析袋中，采用5 mL純水進行定量透析，透析時間為2~4 h；

5）取透析液4.0 mL，采用凱氏定氮儀檢測透析液中的氮含量；

6）凝膠的降解率將按照下面三個公式進行計算：

（公式1）

（公式2）

（公式3）

c_N：采用凱氏定氮儀檢測出的待檢樣品總氮含量，mg/g；

M: 聚殼聚糖或其衍生物單糖單元分子量， g/mol;

m：待檢樣品質量，g；

F：待檢樣品中水分含量，%；

V₁：樣品管消耗標準硫酸溶液體積，L；

V₀：空白管消耗標準硫酸溶液體積，L；

c：標準硫酸溶液的濃度,mol/L；

c₁：聚殼聚糖或其衍生物含量，%；

14：氮原子質量，g/mol；

w：產品中羧甲基葡糖胺聚糖的降解率，%；

X為樣品溶液的總體積與凱氏定氮儀所需測試液體積的比值,L/L。

2.一種多重交聯殼體或其衍生物凝膠的體外梯度降解方法，其特征在于包括以下的步驟:

1）取交聯殼聚糖或其衍生物凝膠1~10 mL,質量濃度范圍為10~500mg/mL,置于10~50mL離心管，加入1~10 mL濃度為0.01~0.05 mol/L的磷酸鹽緩沖液,pH 7.0~7.4，加入400~2000 u溶菌酶，并冷卻至0~5℃；

2）將體系置于恒溫水浴振蕩器中，震蕩溫度設定37℃，每隔1~2 h進行取樣，每次取出降解液100~500 μL，同時補充步驟1）中磷酸鹽緩沖液100~500 μL，總降解時間為24~72 h；

3）將取出后的降解液密封在截留分子量10~14 KDa的透析袋中，采用5 mL純水進行定量透析，透析時間為2~4 h；

4）取透析液4.0 mL，加入1 mL濃度為12 mol/L的鹽酸溶液，于115~121℃條件下水解1~5 h;水解液冷卻至20~25℃后，采用鐵氰化鉀還原糖測定法檢測水解液中還原糖的含量；

5）凝膠的降解率將按照下面的公式進行計算：

m₂= m₁ × M / M₁ （公式4）

w=m₂/ (c×m₃/ρ)×100% （公式5）

M：聚殼聚糖或其衍生物單糖單元分子量，g/mol；

m₂：降解的凝膠質量，g；

m₁：按照鐵氰化鉀還原糖測定法檢測出的還原糖,即氨基葡萄糖的質量，g；

M₁：氨基葡萄糖的分子量，g/mol；

w：凝膠的降解率，%；

c：樣品中聚殼聚糖或其衍生物濃度，g/mol；

m₃：樣品總質量，g；

ρ：樣品的密度，g/mol。

3.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的殼聚糖或其衍生物凝膠分子量范圍為20 KDa至2 000 KDa，脫乙酰度范圍為60%至99%。