[發明專利](S)?5?氮雜螺環[2.4]庚烷?6?羧酸及其衍生物的酶化學制備方法

在審

• 申請號: 201710441363.2
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107488685A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 王歡;呂伏生
• 申請（專利權）人: 南京方生和醫藥科技有限公司;南京鳴皋醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司23211
• 代理人: 梁超

技術領域

本發明涉及藥物領域，具體涉及一種基因型1丙型肝炎藥物雷迪帕韋(Ledipasvir)關鍵中間體(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸及其衍生物的基于酶化學的制備方法；

背景技術

雷迪帕韋是由吉利德科學公司開發的一種NS5A蛋白酶抑制劑，是獲批可用于丙型肝炎全口服治療方案的藥物，可消除對傳統注射藥物干擾素(IFN)的需求。雷迪替韋的合成方法相對比較單一，根據切分經驗分析，切斷碳原子與雜原子的鍵，雷迪替韋的合成路線可以分為兩大部分，一部分為6-[5-(9H-芴-2基)-1H-咪唑基]-5-氮雜螺[2.4]庚烷的衍生物；另一部分為2-{2-雙環[2.2.1]庚基-3-基}-1H-苯并吡啶的衍生物。在其合成路線中，(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸是一種重要中間體。

對(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的合成及其手性中心的構建，已有專利通過下列方法進行合成：

合成方法一：首先，以2-環丙基-1,3-丙二醇原料，發生取代反應，羥基被碘取代得到二取代的碘化物，將產物溶于5攝氏度條件下的DMAC中，然后加入2-氨基乙酸乙酯，Boc₂O，得到氮雜螺環化合物。經過手性拆分，通過LiOH水解，得到(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的衍生物。上述合成路線中涉及到手性拆分，此方法應用相對比較繁多，處理量小，成本相對較高，不適合工業化生產。

合成方法二：

如上式中所示，外消旋混合物1經過水解反應的到外消旋化合物2，將2溶于2-甲基四氫呋喃溶液中培成稀溶液，加入R-2-氨基-1-丁醇。在20攝氏度條件下反應20小時，酸化濃縮得到漿狀物，過濾分離，用正庚烷進行沖洗，在40攝氏度條件下真空干燥，得到產物(收率32％)。此方法為計較經典手性拆分的方法，使用到的均為常見試劑,容易獲取,反應條件較溫和,且操作簡單,很適合用于大量工業化生產。但收率較低，且產生大量有機廢料，產物分離成本較高。

發明內容

為解決上述問題，本發明首次公開了一種基因型1丙型肝炎藥物雷迪帕韋(Ledipasvir)關鍵中間體(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸及其衍生物的基于酶化學的制備方法。

本發明的核心在于：在(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的制備工藝中，引入脂肪酶lipase，對其前體進行立體選擇性水解，從而獲得此關鍵中間體，

反應式為：

具體方案為：

1)將脂肪酶加入到緩沖溶液中，將外消旋混合物1溶于溶劑中配成溶液；

2)將兩種溶液混合，調節PH在6.9-7.1之間反應。

3)a.反應結束后，進行過濾，得濾液1；b.用NaHCO₃水溶液洗滌沉淀，得濾液2；c.將得到的沉淀用MTBE沖洗，MTBE層再用NaHCO₃水溶液再次沖洗。拋棄有機層，保留水層得濾液3；d.將濾液1、2、3混合，加入MTBE，用鹽酸調節PH小于2，向產物中加入MgSO₄，過濾蒸餾得到產物3。

本發明提供的的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法的一種優選方案中，步驟1)中所述脂肪酶為Novozyme435；步驟2)混合后，脂肪酶在體系中的濃度為0.1-0.5mg/ml，所述外消旋混合物1在體系中的濃度為1-10mg/ml。

本發明提供的的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法的一種優選方案中，步驟2)中所述調節pH的操作在20-40℃下用1mol/l的NaOH進行，所述反應溫度為20-40℃，反應時間為3-5小時。

本發明提供的的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法的一種優選方案中，步驟3)中所述NaHCO₃水溶液為質量濃度為5％的NaHCO₃水溶液，，以下用量均以每20-80ml濾液計，步驟3)a中所述NaHCO₃水溶液的用量為100ml；步驟3)b中所述NaHCO₃水溶液的用量為20ml；步驟3)c中所述MTBE的用量為20ml，NaHCO₃水溶液的用量為20ml；步驟3)d中所述加入的MTBE的用量為20ml，加入的MgSO₄的用量為1g。