[發明專利](S)?5?氮雜螺環[2.4]庚烷?6?羧酸及其衍生物的酶化學制備方法

在審

• 申請號: 201710441363.2
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107488685A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 王歡;呂伏生
• 申請（專利權）人: 南京方生和醫藥科技有限公司;南京鳴皋醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司23211
• 代理人: 梁超

1.(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法，其特征在于：反應式為：

步驟為：

1)將脂肪酶加入到緩沖溶液中，將外消旋混合物1溶于溶劑中配成溶液；

2)將兩種溶液混合，調節PH在6.9-7.1之間反應；

3)a.反應結束后，進行過濾，得濾液1；b.用NaHCO₃水溶液洗滌沉淀，得濾液2；c.將得到的沉淀用MTBE沖洗，MTBE層再用NaHCO₃水溶液再次沖洗；拋棄有機層，保留水層得濾液3；d.將濾液1、2、3混合，加入MTBE，用鹽酸調節PH小于2，向產物中加入MgSO₄，過濾蒸餾得到產物3。

2.根據權利要求1所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法，其特征在于：步驟1)中所述脂肪酶為Novozyme435；步驟2)混合后，脂肪酶在體系中的濃度為0.1-0.5mg/ml，所述外消旋混合物1在體系中的濃度為1-10mg/ml。

3.根據權利要求2所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法，其特征在于：步驟2)中所述調節pH的操作在20-40℃下用1mol/l的NaOH進行，所述反應溫度為20-40℃，反應時間為3-5小時。

4.根據權利要求3所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法，其特征在于：步驟3)中所述NaHCO₃水溶液為質量濃度為5％的NaHCO₃水溶液，以下用量均以每20-80ml濾液計，步驟3)a中所述NaHCO₃水溶液的用量為100ml；步驟3)b中所述NaHCO₃水溶液的用量為20ml；步驟3)c中所述MTBE的用量為20ml，NaHCO₃水溶液的用量為20ml；步驟3)d中所述加入的MTBE的用量為20ml，加入的MgSO₄的用量為1g。

5.根據權利要求4所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸的酶化學制備方法，其特征在于：步驟1)所述的緩沖溶液為磷酸緩沖溶液，Tris緩沖溶液，HEPES緩沖溶液中的一種或多種；溶劑為水，DMF、DMSO、乙腈其中一種或多種。

6.(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸衍生物的酶化學制備方法，其特征在于：反應式如下：

其中其中，R1為Boc、Cbzl、Fmoc中的任意一種；R₂為氫、甲基、乙基、羥基中的任意一種；

步驟為：

1)將脂肪酶加入到緩沖溶液中，將外消旋混合物5溶于溶劑中配成溶液；

2)將兩種溶液混合，調節PH在6.9-7.1之間反應；

3)a.反應結束后，進行過濾，得濾液1；b.用NaHCO₃水溶液洗滌沉淀，得濾液2；c.將得到的沉淀用MTBE沖洗，MTBE層再用NaHCO₃水溶液再次沖洗；拋棄有機層，保留水層得濾液3；d.將濾液1、2、3混合，加入MTBE，用鹽酸調節PH小于2，向產物中加入MgSO₄，過濾蒸餾得到產物7。

7.根據權利要求6所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸衍生物的酶化學制備方法，其特征在于：步驟1)中所述脂肪酶為Novozyme435；步驟2)混合后，脂肪酶在體系中的濃度為0.1-0.5mg/ml，所述外消旋混合物1在體系中的濃度為1-10mg/ml。

8.根據權利要求7所述的(S)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-6-羧酸衍生物的酶化學制備方法，其特征在于：步驟2)中所述調節pH的操作在20-40℃下用1mol/l的NaOH進行，所述反應溫度為20-40℃，反應時間為3～5小時。