[發明專利]一種適用焉耆馬對側步步態控制的檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201710438714.4
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號: CN107151701B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 齊·阿拉達爾;李海;艾爾鄧巴依爾;才巴特;鄧海峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆生態與地理研究所;新疆農業大學;昭蘇縣畜牧獸醫站
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種適用焉耆馬對側步步態控制的檢測試劑盒及應用。本發明根據焉耆馬DMRT3基因序列設計特異性引物，正向引物：5'?AGCGACAAAGACACCGACCAG?3'；反向引物：5'?TTGCCAAAGTATTCCTCAGCATCA?3'，以樣本基因組DNA為模板進行PCR擴增，對PCR擴增產物酶切后進行電泳分析，出現雙條帶判定為對側步步態的焉耆馬；出現單一條帶或三條帶判定為非對側步步態的焉耆馬，利用電泳條帶的差異可以判別挑選對側步步態焉耆馬。本發明中對側步步態焉耆馬檢測方法檢測周期短，檢測效率高，而且本發明的靈敏度可達90%，特異度可達100%。

技術領域

本發明涉及馬品種的鑒定方法，具體的，本發明涉及一種檢測對側步步態焉耆馬的試劑盒的技術領域。

背景技術

焉耆馬是一種古老的優良馬品種，目前主要分布于新疆巴音郭楞州境內的和靜縣、和碩縣、焉耆縣、博湖縣等地區；據記載，早在2000年前就存在的該品系馬種，是與蒙古馬雜交繁育的基礎上又與東歸部落帶來的伏爾加河流域的高大、耐寒、善走之馬種雜交，在巴音布魯克高山草原特殊的自然條件下，由蒙古族牧民精心放牧管理和馴育而形成了這個品種；焉耆馬體驅較粗重，公馬平均體高142厘米、母馬平均體高135厘米；焉耆馬以善走著稱，日行70-80公里，能日夜兼程包括爬山持續行走3-4天，具有耐力久、承重大的特征。

對側步為馬術運動術語，民間俗稱“走馬”，馬蹄落地呈兩蹄聲，為兩節拍步法。走馬又按其步伐形態分為速步和對側步。速步亦稱花步或大走，是指對角線的前后蹄同時抬起、同時前邁、同時落蹄，反側亦然，呈X形交叉同步的步式。對側步亦稱小走，是指同側的前后蹄同時抬起、邁進和落蹄的II字型步伐。走馬在國際上較受歡迎，因其步伐最適合輕駕馬車比賽。對走馬的兩種步態，分別被稱呼為速步和對側步：速步為對角線的前后蹄同時抬起同時落下，對側步為同側的前后蹄同時抬起同時落下；一般認為，走馬中的速步步態是較為常見的走馬步伐，可以通過后天訓練培養出來，而對側步步態是要具備天生的能力，因此，如需選育具備對側步步態的好馬，不僅需要后天的精心訓練，更需要具備先天的基因優勢。

焉耆馬馬種中先天對側步中概率較高，在焉耆馬種中選育對側步馬匹在馬匹選育工作中具有重要意義。而目前的傳統的目測方法檢測焉耆馬的對側步步態的方法，只有馬駒到了一歲以后對其進行調教訓練時才能很好的對其步態進行評斷，無法對剛出生的馬駒進行早期的檢測。最近在《Nature》雜志中Lisa S.Andersson等人發表的一項研究表明，馬的DMRT3基因上的一個突變對冰島馬的步態有一定的影響。冰島馬的DMRT3基因上第902個堿基由C變為A，導致了編碼氨基酸由絲氨酸變為終止密碼子，影響了該蛋白質在生物過程中的作用，從而影響了冰島馬的運動方式。該研究所示的檢測方法中，未公開PCR擴增的引物序列，在后續的何美升等人發表的《伊犁馬DMRT3基因多態性研究》研究成果中，雖然公開了引物序列，但是該檢測方法在用于檢測焉耆馬的DMRT3基因時，擴增的特異性與效率都較低，容易導致錯誤引發，且檢測周期長，檢測效率低，靈敏度和特異度較低，亟需開發快速準確鑒定焉耆馬對側步步態的檢驗試劑盒。

發明內容

針對現有技術中，馬的對側步步態是由可以遺傳的一個基因突變造成的，并且公開了馬的DMRT3基因影響了馬的運動方式，盡管公開了引物序列，但是該引物序列在用于檢測焉耆馬的DMRT3基因時，擴增的特異性與效率都較低，容易導致錯誤引發，且檢測周期長，檢測效率低，靈敏度和特異度較低，亟需要解決；本發明旨在于提供適用焉耆馬對側步步態控制的檢測試劑盒及應用，操作方法簡單、快捷，針對于焉耆馬檢測靈敏度高、特異性好，有效的解決了現有技術中擴增的特異性與效率都較低，容易導致錯誤引發，且檢測周期長，檢測效率低，靈敏度和特異度較低的問題。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：

本發明提供一種適用焉耆馬對側步步態控制的檢測試劑盒，試劑盒通過以下共建體系建成獲得。

(1)設計引物對：根據焉耆馬DMRT3基因序列設計特異性引物。