[發(fā)明專利]一種適用焉耆馬對側(cè)步步態(tài)控制的檢測試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710438714.4
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN107151701B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 齊·阿拉達(dá)爾;李海;艾爾鄧巴依爾;才巴特;鄧海峰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所;新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適用焉耆馬對側(cè)步步態(tài)控制的檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒通過以下共建體系建成獲得：

(1)設(shè)計(jì)引物對：根據(jù)焉耆馬DMRT3基因序列設(shè)計(jì)特異性引物；正向引物：5'-AGCGACAAAGACACCGACCAG-3'；反向引物：5'-TTGCCAAAGTATTCCTCAGCATCA-3'；

(2)PCR反應(yīng)試劑：10×PCR緩沖液2uL、2.5mM dNTP 2uL、10uM正向引物0.5uL、10uM反向引物0.5uL、taq酶0.2uL、樣本基因組DNA 1uL、ddH₂O 18uL；

(3)酶切所需試劑：Dde I核酸內(nèi)切酶1uL及其緩沖液2uL。

2.一種如權(quán)利要求1所述的適用焉耆馬對側(cè)步步態(tài)控制的檢測試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待檢測樣本基因組DNA；

(2)利用正向引物、反向引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：10×PCR緩沖液2uL、2.5mM dNTP 2uL、10uM正向引物0.5uL、10uM反向引物0.5uL、taq酶0.2uL、樣本基因組DNA1uL和ddH₂O 13.8uL，總計(jì)20μL；擴(kuò)增程序?yàn)?5℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，40個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min；

(3)擴(kuò)增PCR反應(yīng)產(chǎn)物10uL與Dde I核酸內(nèi)切酶1uL、酶切緩沖液2uL和ddH₂O 18uL，37℃水浴2h，65℃水浴30min，酶切后電泳分析出現(xiàn)雙條帶判定為對側(cè)步步態(tài)的馬；出現(xiàn)單一條帶或三條帶判定為非對側(cè)步步態(tài)的馬。