[發明專利]X?連鎖淋巴增殖綜合征診斷試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710437608.4
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號: CN107037219A
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發明（設計）人: 王昭;高卓;張嘉;王旖旎;王晶石;吳林;賴雯苑;金志麗;孟碩;宋悅;崔婷婷
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N15/14
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李丙林

1.一種X-連鎖淋巴增殖綜合征診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

抗人CD3、CD56、CD8a、SAP的流式熒光抗體、所述抗人SAP的流式熒光抗體的同型對照熒光抗體、抗人SAP的Western Blot抗體以及所述抗人SAP的Western Blot抗體對應的二抗。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗人CD3、CD56、CD8a、SAP的流式熒光抗體以及所述同型對照熒光抗體上所帶有的熒光標記依次為FITC、APC、Percp Cy5.5、PE、PE。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括抗凝劑、細胞固定劑、細胞破膜劑、流式緩沖液、蛋白裂解液中的一種或多種。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述流式緩沖液的配方為：含有1.8％～2.2％FBS和1.8mM～2.2mM EDTA的1×PBS溶液。

5.權利要求1～4任一項所述的試劑盒在制備診斷X-連鎖淋巴組織增殖綜合征的產品中的應用。

6.一種使用權利要求1～4任一項所述的試劑盒檢測CTL和NK細胞中SAP蛋白豐度的方法，其特征在于，包括：

1).分離待檢樣本中的外周血單個核細胞及并計數調整細胞濃度；

2).向步驟1)中的細胞中同時加入抗人CD3、CD56、CD8a的流式熒光抗體并孵育；

3).離心，將沉淀與細胞固定劑共孵育；

4).離心，將沉淀與細胞破膜劑共孵育；

5).離心，用流式緩沖液洗滌沉淀后重懸；

6).將重懸后的樣品分為兩組，分別加入抗人SAP的流式熒光抗體和同型對照熒光抗體并孵育；

7).離心，用流式緩沖液洗滌沉淀后重懸，并用流式細胞儀進行檢測；

和/或；

a).分離待檢樣本中的外周血單個核細胞并用蛋白裂解液裂解收集蛋白；

b).將蛋白使用所述抗人SAP的Western Blot抗體以及所述抗人SAP的Western Blot抗體對應的二抗進行Western Blot實驗，讀取所得條帶的灰度值或熒光值；

其中步驟1)～7)與步驟a)～b)沒先后順序。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述細胞濃度為3.5～4.5×10⁶/ml。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，孵育條件為：

室溫避光孵育15～25min。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，CD3、CD56、CD8a的抗體的濃度分別為8～12μl/100μl、4～6μl/100μl、4～6μl/100μl；

優選的，抗人SAP的流式熒光抗體和同型對照熒光抗體的抗體濃度均為4～6μl/100μl。

10.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟b)中，抗人SAP的Western Blot抗體按0.5～1.5：1000添加，室溫下搖動孵育1～3h后2～6℃孵育8～16h。