[發明專利]用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒及其檢測方法在審
| 申請號： | 201710437605.0 | 申請日： | 2017-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN107164495A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發明（設計）人： | 韋玉軍;李航;劉文干;蘇軍;吳遠航 | 申請（專利權）人： | 安徽安龍基因醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市廬陽*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 人類 kras 基因突變 檢測 試劑盒 及其 方法 | ||
1.用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：包括7種基因的特異性引物對和7條與特異性引物配合使用的探針引物，所述的特異性引物對和探針引物為：
2.根據權利要求1所述的用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：還包括質控系統或/和內控系統，所述的質控系統為一對質控引物和相應的質控探針，所述的內控系統為一對內控引物和相應的內控探針，具體如下：質控引物：
上游引物：5’AATATAAACTTGTGGTAGTTGGA3’
下游引物：5’TTCGTCCACAAAATGATTCTGA3’
質控探針：5’CTGTATCGTCAAGGCACTCTT3’；
內控引物：
上游引物：5’CCCAGCAGTTTGGCCC3’
下游引物：5’TCCTTAATGTCACGCACGAT3’
內控探針：5’ACCACCACGGCCGAGCGG3’。
3.根據權利要求1或2任意所述的用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒還包括KRAS PCR反應液、酶系1、陽性對照、陰性對照和DEPC水。
4.根據權利要求1所述的用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒可用于血清游離DNA樣本、組織樣本或穿刺樣本的KRAS基因突變的檢測。
5.根據權利要求1-4所述的用于人類KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：包括PCR擴增試劑和對照試劑，所述的擴增試劑、對照試劑的組成成分和終濃度如下：
6.用于人類KRAS基因突變的檢測方法，所述的方法包含以下步驟：
(1)樣本DNA的提取
血清游離DNA提取和組織樣本DNA提取；
(2)PCR反應體系的配制
分別配制PCR反應液16ul，酶系1、2ul、引物探針混合液2ul，模板DNA5ul，陰性對照和質控視為樣本，作相同處理；
(3)結果判讀：
根據熒光PCR擴增儀顯示的Ct值判斷檢測結果：利用特異性引物和熒光探針進行PCR檢測，突變和質控由FAM指示，內控由HEX信號指示，通過計算ΔCt的大小進行判斷，反應管的ΔCt值＜ΔCt Cut-off值時，則樣品為該反應管對應信號突變陽性，反之則為陰性或低于試劑盒的檢測下限。
ΔCt值＝突變樣本Ct值-質控Ct值
表 CutoffΔCt值
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