[發(fā)明專利]基于堿基編輯的基因敲除方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710437122.0 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107164377A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李廣磊;尚小云;張琳琳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 王小平 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/113 | 分類號(hào)： | C12N15/113;C12N15/90;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京迎碩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11512 | 代理人： | 張群峰,錢揚(yáng)保 |
| 地址： | 518067 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 堿基 編輯 基因 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種基因敲除方法，包括：
選定待敲除基因的編碼區(qū)的20bp–NGG目標(biāo)序列，使其包含完整的目標(biāo)密碼子CAA、CAG或CGA；
利用sgRNA序列來將BE3定位到目標(biāo)序列以使目標(biāo)密碼子中的目標(biāo)單堿基C變成T從而相應(yīng)引入終止密碼子TAA或TAG、TGA以實(shí)現(xiàn)基因敲除，
其中目標(biāo)單堿基C位于目標(biāo)序列的第1-8位，目標(biāo)密碼子與NGG間隔12-14bp,并且目標(biāo)密碼子的上游緊鄰堿基不能為G；
所述sgRNA序列為與目標(biāo)序列互補(bǔ)對(duì)應(yīng)的20bp序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中BE3選自：rAPOBEC1-SaCas9-NLS-UGI-NLS；3xUGI-rAPOBEC1-SaCas9-NLS-UGI-NLS；rAPOBEC1-SpCas9-NLS-UGI-NLS；3xUGI-rAPOBEC1-SpCas9-NLS-UGI-NLS。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，用于敲除如下八個(gè)靶基因：人PD1、LAG3、TIGIT、VISTA、2B4、CD160以及小鼠TIM3和LAG3，與其相應(yīng)的sgRNA序列分別與序列一至八所示目標(biāo)基因序列互補(bǔ)。
4.權(quán)利要求1所述方法在細(xì)胞系HEK293T進(jìn)行人PD1、LAG3、TIGIT、VISTA、2B4、CD160基因敲除的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述方法在人T細(xì)胞進(jìn)行人PD1、LAG3、TIGIT、VISTA、2B4、CD160基因敲除的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的應(yīng)用而獲得的分離的T細(xì)胞或細(xì)胞系或它們的次代培養(yǎng)物。
7.一種用于基因敲除的試劑盒，包括權(quán)利要求1或2中所述的sgRNA、BE3以及擴(kuò)增試劑。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于王小平，未經(jīng)王小平許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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