[發明專利]一種寡聚賴氨酸修飾的重組去鐵蛋白納米籠及其制備

在審

• 申請號: 201710435975.0
• 申請日: 2017-06-07
• 公開（公告）號: CN107286249A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 吳正紅;馬茁;袁世睿
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種寡聚賴氨酸修飾的重組去鐵蛋白籠，其特征在于，其融合方式為不同數目的賴氨酸融合于人鐵蛋白H亞基(FTH)的N端，通式為：n-Lys-HFn，其中，Lys表示賴氨酸，n為賴氨酸在單個蛋白亞基N端的修飾個數，HFn指由24個FTH自組裝而形成的蛋白籠。

2.權利要求1所述的寡聚賴氨酸修飾的重組去鐵蛋白籠的制備方法，其特征在于，包括以下過程：

1)重組蛋白籠表達工程菌的構建：

在FTH基因編碼序列的5’端修飾Lys編碼基因，亞克隆至質粒載體pET-30a(+)中，并轉化至E.coli ArcticExpress^TM的感受態細胞。通過Kanamycin抗性篩選陽性單克隆轉化子，以獲得目的重組蛋白籠表達工程菌。

2)融合蛋白的表達和收菌：

將表達工程菌以1％的接種比例接種于LB-Kan⁺培養基中，加入IPTG誘導表達，離心收集菌體。

3)融合蛋白的分離純化：

破碎步驟(2)得到的菌體，離心收集上清。將上清置于水浴加熱，再次離心獲得含有目的融合蛋白的上清液。采用鎳柱親和層析法對上清液的雜蛋白及目的融合蛋白進行分離與純化。

4)融合蛋白的腸激酶切：

向步驟(3)得到的目的融合蛋白中加入重組腸激酶，以切除組氨酸標簽，最終得到所述目的蛋白(n-Lys-HFn)。