[發(fā)明專利]浙江道地性白術(shù)的鑒定方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710435641.3 | 申請日： | 2017-06-11 |
| 公開（公告）號： | CN107164494A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳紹寧;胡秀芳;梁宗鎖;呂洪飛;楊東風;賈巧君;丁先鋒;陳羽迪 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江理工大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 浙江 道地 白術(shù) 鑒定 方法 | ||
1.浙江道地性白術(shù)的鑒定方法，包括DNA提取，其特征是還包括以下步驟：
1)、PCR擴增：
PCR擴增體系：
引物F(10μM) 0.2μl
引物R(10μM) 0.2μl
Green-2-Go Master mix(2×) 5μl
DNA 3～15ng
RNase free H2O 定容至 10μl；
引物F：ATGCGATACTTGGTGTGAAT，
引物R：GACGCTTCTCCAGACTACAAT；
PCR擴增程序為：
95℃變性5min；
95℃變性15s，Tm退火25s，72℃延伸30s；40個循環(huán)；引物退火溫度為55-59℃；
2)、將擴增產(chǎn)物直接進行HRM：
HRM程序為：95℃，1min；40℃，1min；65℃，1s；95℃，1min；降溫至25℃；
收集65-95℃的熒光信號數(shù)據(jù)，獲得高分辨率熔解曲線；當熔解曲線滿足Tm值92℃出現(xiàn)單峰曲線形狀時，判定是浙白術(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浙江道地性白術(shù)的鑒定方法，其特征是：
所述步驟1)中退火溫度為57℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的浙江道地性白術(shù)的鑒定方法，其特征是：
所述步驟2)中在Roche LightCyclerTM 480Ⅱ熒光定量PCR儀器上進行HRM。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的浙江道地性白術(shù)的鑒定方法，其特征是：
所用軟件為LightCycler 480Ⅱ分析軟件。
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