[發(fā)明專利]一種檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710433401.X
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107219366B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張浩明;楊利;于曉明;陳瑾;鄭其升;侯繼波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/569
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發(fā)明提供一種檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，涉及生物檢測試劑領(lǐng)域。分泌抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株10A4，保藏號為：CCTCC NO:C201779。本發(fā)明還提供所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗PEDV單克隆抗體10A4’和用于檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，該試劑盒包括檢測板，所述檢測板是采用所述抗PEDV單克隆抗體10A4’包被的酶標(biāo)板。本發(fā)明篩選到了具有較高特異性、較高親和力的抗PEDV單克隆抗體，采用該單克隆抗體制備的試劑盒檢測豬初乳，具有較高的靈敏度、特異性和重復(fù)性，假陽性率低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測試劑領(lǐng)域，具體涉及一種檢測豬初乳中PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒。

背景技術(shù)

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的豬的一種急性腸道傳染病，以水瀉、嘔吐和脫水為特征，病理變化主要表現(xiàn)在豬的空腸和回腸部分的腸絨毛的萎縮和脫落。PEDV對豬的危害很大，各種年齡的豬均可發(fā)病，對哺乳仔豬的危害最為嚴(yán)重，20日齡以內(nèi)仔豬死亡率達(dá)95％以上，給養(yǎng)豬業(yè)帶來重大經(jīng)濟(jì)損失。

仔豬出生時體內(nèi)無免疫球蛋白，出生后通過吮吸初乳的方式獲得母源抗體。初乳中含有大量的IgG和較多的IgA。IgG的分子量較大，不容易穿過腸壁進(jìn)入腸腔，對胃酸和消化酶的抵抗力較差；而IgA分子量較小，可以抵御胃酸和消化酶的消化，并且與腸黏膜有親和作用，所以初乳中IgA是在腸道中發(fā)揮對仔豬的保護(hù)作用的主要成分。通過檢測免疫母豬分泌的初乳中抗PEDV特異性IgA抗體，對妊娠母豬流行性腹瀉疫苗免疫效果評價、哺乳仔豬免疫程序制定、流行狀態(tài)監(jiān)測均具有重要意義。

目前使用較多的方法是測定初乳中PEDV的中和抗體，但是初乳中不但含有IgA抗體，還含有大量的抗PEDV特異性IgG抗體，干擾了PEDV特異性IgA抗體檢測的準(zhǔn)確性。現(xiàn)有技術(shù)中，還沒有能夠準(zhǔn)確檢測豬初乳中PEDV特異性IgA抗體的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種分泌抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株10A4、采用該細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體制備的檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，對豬初乳樣品進(jìn)行檢測，具有較高的特異性、靈敏度和重復(fù)性。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種分泌抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株10A4，保藏號為：CCTCCNO:C201779。

本發(fā)明還提供所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗PEDV單克隆抗體10A4’。

本發(fā)明還提供一種用于檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，其包括檢測板，所述檢測板是采用所述抗PEDV單克隆抗體10A4’包被的酶標(biāo)板。

優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述抗PEDV單克隆抗體10A4’的包被濃度為1-3μg/mL。

在本發(fā)明中，所述試劑盒還包括將10^6.0TCID₅₀/mL的PEDV病毒液滅活后得到的PEDV夾心抗原。

在本發(fā)明中，所述試劑盒的酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗豬IgA抗體。

在本發(fā)明中，所述試劑盒還包括陽性對照、陰性對照、樣品稀釋液、洗滌液、TMB底物顯色液A、B液和終止液；所述陽性對照是從免疫兩次TGEV和PEDV二聯(lián)滅活苗的母豬初乳中分離的乳清；所述陰性對照是從未接種PEDV疫苗的SPF級豬初乳中分離的乳清；所述樣品稀釋液是含有1％BSA的PBST緩沖液；所述洗滌液為PBST緩沖液；所述終止液為2M的硫酸水溶液。

最后，本發(fā)明提供采用所述試劑盒檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的方法，包括如下步驟：