[發(fā)明專利]一種檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710433401.X
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107219366B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張浩明;楊利;于曉明;陳瑾;鄭其升;侯繼波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/569
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.一種用于檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，其特征在于包括檢測板，所述檢測板是采用抗PEDV單克隆抗體10A4’包被的酶標板，所述抗PEDV單克隆抗體10A4’是由雜交瘤細胞株10A4分泌的，其保藏號為：CCTCC NO:C201779；所述抗PEDV單克隆抗體10A4’的包被濃度為1-3μg/mL；所述試劑盒還包括將10^6.6、10^6.3、10^6.0或10^5.7TCID₅₀/mL的PEDV病毒液滅活后得到的PEDV夾心抗原，酶標二抗和陽性對照；所述陽性對照是從母豬初乳中分離的乳清。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，其特征在于所述陽性對照是從免疫兩次TGEV和PEDV二聯(lián)滅活苗的母豬初乳中分離的乳清。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，其特征在于所述試劑盒的酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgA抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的夾心ELISA試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括樣品稀釋液、陰性對照、洗滌液，TMB底物顯色液A、B液和終止液；所述陰性對照是從未接種PEDV疫苗的SPF級豬初乳中分離的乳清；所述樣品稀釋液是含有1%BSA的PBST緩沖液；所述洗滌液為PBST緩沖液；所述終止液為2M的硫酸水溶液。

5.采用權(quán)利要求4所述試劑盒檢測豬初乳中抗PEDV特異性IgA抗體的非診斷目的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）夾心抗原孵育：在檢測板的每個孔中加入PEDV夾心抗原，在37℃孵育1h，洗滌；

（2）加入待檢樣品：將待檢樣品用樣品稀釋液稀釋40倍，以100μL/孔加入待檢樣品反應孔，陰性對照孔內(nèi)加入陰性對照，陽性對照孔內(nèi)加入陽性對照，37℃反應30min，洗滌；

（3）加入酶標二抗：每個孔中均加入100μL酶標二抗，37℃反應30min，洗滌；

（4）顯色與終止：將TMB底物顯色液A、B液等體積混合，每個孔中均加入100μLTMB底物顯色液A、B液的等體積混合液，37℃避光反應10min，隨后每個孔中均加入100μL終止液，終止反應；

（5）判定：讀取終止反應后的檢測板各孔的OD₄₅₀值，按照如下方法判定結(jié)果：如果陰性對照孔的OD₄₅₀值<0.2、且陽性對照孔的OD₄₅₀值>0.8 ，那么當待檢樣品反應孔OD₄₅₀值≥0.250為陽性，當待檢樣品反應孔OD₄₅₀值<0.250為陰性。