[發(fā)明專利]一種比率型熒光檢測(cè)H2S的試劑及其合成方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710432662.X
• 申請(qǐng)日: 2017-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN107290312A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康錦;霍方俊;陰彩霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司)14105
• 代理人: 張福增

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及硫化氫檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種比率型熒光檢測(cè)H₂S的試劑及其合成方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

硫化氫是一種無(wú)色有臭雞蛋氣味的氣體，長(zhǎng)久被認(rèn)為是有毒的、對(duì)環(huán)境有害的。但近十幾年來(lái)，大量的研究發(fā)現(xiàn)硫化氫在哺乳動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在，而且發(fā)揮著極其重要的生理作用。此外，研究表明硫化氫(H₂S)是繼一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第三種氣體信號(hào)分子，具有多種生理功能。在植物體內(nèi)，硫化氫發(fā)揮調(diào)節(jié)種子發(fā)芽，根系生長(zhǎng)，葉子氣孔打開與閉合，以及細(xì)胞滲透壓，鹽壓等功能，在動(dòng)物體內(nèi)，硫化氫的作用包括調(diào)制血壓，緩解缺血性再灌注損傷，發(fā)揮抗炎作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激壓力，降低代謝率等。硫化氫水平的改變與多種疾病相關(guān)，如唐氏綜合征和阿爾茨海默氏病和心血管疾病等。硫化氫能夠發(fā)揮降低血壓，調(diào)節(jié)心率的作用。最新的研究發(fā)現(xiàn)，硫化氫具有降低癌癥發(fā)病率的作用。到目前為止，已經(jīng)有很多方法用來(lái)檢測(cè)體內(nèi)及體外硫化氫及硫氫根濃度，如：亞甲基藍(lán)法、氣相色譜及小分子熒光探針。其中，小分子熒光探針檢測(cè)由于其具有高靈敏度、高選擇性、非侵入性、操作簡(jiǎn)便及實(shí)時(shí)成像的特征，已被視為是最有前景的檢測(cè)技術(shù)。

在本發(fā)明中，合成了7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯(HS-1)，通過(guò)H₂S反應(yīng)前后熒光強(qiáng)度比值的變化，實(shí)現(xiàn)H₂S的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種比率型熒光檢測(cè)H₂S的試劑及其合成方法和應(yīng)用。

本發(fā)明提供的一種比率型熒光檢測(cè)H₂S的試劑，是7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯(HS-1)，英文名:7-(diethylamino)-2-oxo-2H-chromen-4-yl 2-(pyridin-2-yl disulfanyl)benzoate，結(jié)構(gòu)式為：

7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯(HS-1)的合成方法，步驟為：

(1)在N₂保護(hù)下，0℃時(shí)向丙二酸(1eq.)和苯酚(2eq.)的混合物中緩慢滴加過(guò)量的POCl₃，混合物加熱到115℃反應(yīng)直到大量HCl氣體被釋放(大約1.5h)；上層清液被傾倒在水中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)層，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋干后得棕色油狀化合物丙二酸二苯酯；

(2)將化合物丙二酸二苯酯(1eq.)和間羥基-N,N-二乙基苯胺(1eq.)溶解在甲苯中，反應(yīng)液回流7h；反應(yīng)完成后冷卻至室溫，有固體析出，過(guò)濾，濾餅用正己烷洗滌，干燥，得黃色固體7-二乙胺基-4-羥基香豆素；

(3)將二巰基吡啶(1eq.)溶于氯仿中，加入2-巰基水楊酸(1eq.)，滴加15mmol氯化亞砜，攪拌1h，生成淡黃色固體，抽濾，干燥得到化合物2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸；

(4)將化合物2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸(1eq.)，7-二乙胺基-4-羥基-香豆素(1eq.)，1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(1eq.)，和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.1eq.)，加入二氯甲烷中，室溫?cái)嚢?2h；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑并將剩余物過(guò)硅膠柱，得到黃色固體7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯。

一種比率型熒光檢測(cè)H₂S的方法，步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的PBS緩沖溶液，配制2mM的HS-1的DMSO溶液；

(2)、將2000μL pH 7.4的PBS緩沖溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，403nm的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，519nm的熒光逐漸減弱；